腫瘤抗原肽篩選與驗證的方法新探.pdf

1、該研究共分四部分,主要內(nèi)容和結(jié)果如下:一、特異性T細(xì)胞對抗原肽—MHC I類分子—gfp復(fù)合物攝取的研究;在此研究中運(yùn)用MHC I類分子-gfp融合蛋白標(biāo)記抗原遞呈細(xì)胞,通過觀測gfp蛋白在細(xì)胞之間的轉(zhuǎn)移,來初步驗證腫瘤免疫中也存在TCR介導(dǎo)的抗原肽-MHC I類分子復(fù)合物的內(nèi)吞.二、K<'b>-his<,6>融合基因的構(gòu)建及其在真核細(xì)胞中的表達(dá);上一部分的實驗初步研究了k<'b>-gfp融合蛋白與TCR的相互作用,但在進(jìn)一步的分離和功

2、能實驗中卻遇到了障礙.一方面,作為標(biāo)記與目的蛋白融合可以方便的標(biāo)示目的蛋白的表達(dá)情況,但gfp本身是個相當(dāng)大的蛋白,會降低目的蛋白的表達(dá);另一方面,進(jìn)一步分離時需使用抗gfp的單克隆抗體進(jìn)行免疫共沉淀,既不經(jīng)濟(jì)又不方便.His<,6>是近來使用較多的一類標(biāo)記分子,六個組氨酸可以通過氫鍵與金屬離子(如鎳離子)螯合成環(huán)狀結(jié)構(gòu),如果把鎳離子固定在凝膠柱上,蛋白樣品過柱時,帶有his<,6>標(biāo)記的蛋白就會被吸附在柱上,從而能很方便地被分離出來.

3、運(yùn)用his<,6>標(biāo)記蛋白可以提供很多便利.三、特異性T細(xì)胞對抗原肽—MHC I類分子—his<,6>復(fù)合物攝取的分析;黑色素瘤是一種惡性程度相當(dāng)高的惡性腫瘤,也是在腫瘤免疫中研究最多的腫瘤之一,其腫瘤抗原的免疫原性較強(qiáng),也便于對其進(jìn)行深入的功能研究,因此該研究選擇鼠黑色素瘤細(xì)胞B16作為腫瘤抗原肽研究的主要模型細(xì)胞.四、牛痘病毒介導(dǎo)腫瘤抗原肽微小基因體內(nèi)表達(dá)對抗原肽特異性的驗證分析;研究中我們選取了P815的腫瘤相關(guān)抗原肽:KYQAV