星形膠質(zhì)細(xì)胞移植促進(jìn)小鼠脊髓損傷后軸突再生和運(yùn)動(dòng)功能恢復(fù).pdf

1、目的：NPC-Astro和Olig2PC-Astro是采用基因敲入技術(shù)（knock in）從人的胚胎干細(xì)胞（hESCs）誘導(dǎo)分化而來(lái)的兩種新型的未成熟星形膠質(zhì)細(xì)胞，小鼠脊髓T10全橫斷后在損傷處分別移植這兩種星形膠質(zhì)細(xì)胞，研究細(xì)胞移植對(duì)損傷區(qū)域形成的作用；對(duì)損傷兩側(cè)神經(jīng)元存活的影響；觀察細(xì)胞移植對(duì)脊髓上、下行投射神經(jīng)軸突再生的作用；對(duì)神經(jīng)環(huán)路的重建和對(duì)后肢運(yùn)動(dòng)功能恢復(fù)的作用；同時(shí)也為進(jìn)一步探究NPC-Astro和Olig2PC-Astr

2、o這兩種星形膠質(zhì)細(xì)胞的特性提供一定的線索。
　　方法：首先體外培養(yǎng)NPC-Astro和Olig2PC-Astro，運(yùn)用細(xì)胞免疫熒光鑒定這兩種星形膠質(zhì)細(xì)胞，觀察兩種細(xì)胞在培養(yǎng)狀態(tài)下的形態(tài)和差別。對(duì)6-8周齡的C57BL/6小鼠做脊髓 T10節(jié)段的全橫斷模型，脊髓損傷后一天在損傷處分別移植這兩種細(xì)胞。損傷后四周取材冰凍切片，運(yùn)用免疫熒光染色觀察 NPC-Astro和Olig2PC-Astro移植后的存活、分布、與宿主組織的整合以及向損

3、傷頭端和損傷尾端的遷移情況。損傷后四周進(jìn)行感覺(jué)神經(jīng)軸突的標(biāo)記。損傷后六周取材切片，運(yùn)用免疫熒光染色研究細(xì)胞移植對(duì)損傷區(qū)域形成的作用、對(duì)損傷兩側(cè)神經(jīng)元的保護(hù)作用和對(duì)感覺(jué)神經(jīng)軸突再生的作用。損傷后十周運(yùn)用免疫熒光染色研究細(xì)胞移植對(duì)不同類型神經(jīng)軸突再生的作用以及再生軸突與損傷尾端的神經(jīng)元有無(wú)突觸重建。小鼠脊髓損傷后定期進(jìn)行曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)，運(yùn)用BMS評(píng)分評(píng)估后肢運(yùn)動(dòng)功能的恢復(fù)情況
　　結(jié)果：NPC-Astro和Olig2PC-Astro在培養(yǎng)狀

4、態(tài)下都表達(dá)星形膠質(zhì)細(xì)胞的標(biāo)記物GFAP和S100β，都可以用hM抗體進(jìn)行體外和在體的標(biāo)記，兩種細(xì)胞在培養(yǎng)狀態(tài)下形態(tài)存在一定的差別；細(xì)胞移植后4周可見(jiàn)兩種星形膠質(zhì)細(xì)胞在脊髓損傷處大量存活并與宿主組織整合在一起，移植的細(xì)胞可以向損傷頭端和尾端進(jìn)行遷移；與對(duì)照組相比，NPC-Astro和Olig2PC-Astro移植后損傷區(qū)域面積顯著減小；兩種細(xì)胞對(duì)損傷兩側(cè)的神經(jīng)元有顯著的保護(hù)作用，其中Olig2PC-Astro的神經(jīng)元保護(hù)作用強(qiáng)于NPC-A

5、stro；neurofilament抗體免疫熒光染色表明損傷頭端和尾端都有神經(jīng)軸突再生進(jìn)入損傷區(qū)域，部分神經(jīng)軸突甚至穿過(guò)損傷區(qū)域到達(dá)損傷對(duì)側(cè)；我們還觀察到了脊髓損傷后上行的感覺(jué)神經(jīng)軸突和下行的5-HT能神經(jīng)軸突可以再生，再生的5-HT能神經(jīng)軸突可以穿過(guò)損傷區(qū)域并且與損傷尾端多種類型的神經(jīng)元形成新的突觸聯(lián)系；曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)顯示細(xì)胞移植小鼠后肢的運(yùn)動(dòng)功能得到了恢復(fù)。
　　結(jié)論：NPC-Astro和Olig2PC-Astro移植后大量存活，與