長(zhǎng)白山藥用真菌樹舌凝集素的分離純化及生化特性.pdf

1、凝集素是普遍存在于動(dòng)物、植物和微生物中一類非免疫來源的蛋白質(zhì)或糖蛋白。近年來，對(duì)凝集素的研究發(fā)展較快，主要集中在其生理生化特性和生物學(xué)功能方面，如在植物防病抗蟲、基因工程和抗腫瘤等方面有著較為深入的研究和應(yīng)用。本實(shí)驗(yàn)以長(zhǎng)白山藥用真菌樹舌為原料，用硫酸銨分級(jí)沉淀、離子交換和HPLC層析等方法，從樹舌菌絲體中分離和純化出樹舌凝集素(Ganodermaapplanatumlectin，簡(jiǎn)稱GAL)，并對(duì)其理化性質(zhì)和生物學(xué)活性進(jìn)行了初步研究。

2、 純化的樹舌凝集素GAL經(jīng)HPLC分析其分子量為58KDa左右，SDS-PAGE檢測(cè)亞基分子量約為15KDa，表明GAL由四個(gè)亞基組成。氨基酸組成分析結(jié)果表明GAL中甘氨酸含量較高(～35.75％)，不含蛋氨酸和色氨酸，苯酚-硫酸法測(cè)得GAL含有11.2％的中性糖。圓二色CD譜顯示GAL含有3.6％的α螺旋、46.8％的β轉(zhuǎn)角和49.6％無規(guī)則卷曲，不含有β折疊。GAL可以凝集供試的2種動(dòng)物血和3種血型人血的血紅細(xì)胞，但對(duì)各種血紅

3、細(xì)胞凝集滴度不同；糖抑制實(shí)驗(yàn)表明，只有棉籽糖和D-松三糖可以部分抑制GAL的凝血活性。GAL具有較好的熱穩(wěn)定性，其凝血活性不受Ca2+、Mg2+和Zn2+等二價(jià)陽(yáng)離子的影響；抑菌實(shí)驗(yàn)表明，GAL對(duì)大腸桿菌、枯草桿菌和金黃色葡萄球菌均有抑菌作用。 同時(shí)也開展了樹舌基因組DNA的提取、樹舌凝集素蛋白基因克隆和PCR擴(kuò)增等方面的初步研究，為樹舌凝集素的分子生物學(xué)研究提供了相關(guān)的基礎(chǔ)。 通過本實(shí)驗(yàn)，初步確定樹舌中含有樹舌凝集素，