肉雞脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞與綿羊羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞生物學(xué)特性與肝損傷修復(fù)研究.pdf

1、畜禽遺傳資源一直以來就是農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的基石，是人們生活的保障，它影響著社會與經(jīng)濟(jì)的發(fā)展，家養(yǎng)動物遺傳資源理應(yīng)受到重大的保護(hù)。干細(xì)胞所具有的自我更新和多向分化能力，為畜禽遺傳資源的保護(hù)開辟了新思路。由于間充質(zhì)干細(xì)胞所具有的優(yōu)點(diǎn)，在遺傳資源保護(hù)與利用、組織工程學(xué)等方面得到廣泛認(rèn)可。本實(shí)驗(yàn)以肉雞脂肪和綿羊羊膜來源的間充質(zhì)干細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)對象，進(jìn)行了細(xì)胞分離培養(yǎng)、生物學(xué)特性、誘導(dǎo)分化及移植治療小鼠肝損傷的研究，得到以下結(jié)果:
　　1.利用膠原酶Ⅰ

2、分離得到肉雞ADSCs，并在體外培養(yǎng)37代，主要呈現(xiàn)長梭形;經(jīng)RT-PCR和免疫組化檢測，細(xì)胞表達(dá)CD29、CD44、CD71和CD73，而不表達(dá)CD31，分離培養(yǎng)的確實(shí)是脂肪來源的MSCs。通過流式細(xì)胞儀分析，CD29、CD44、CD71和CD73在肉雞ADSCs中高表達(dá)。ADSCs經(jīng)歷潛伏期、對數(shù)期、穩(wěn)定期和衰亡期，生長曲線呈典型的“S”形，符合細(xì)胞在體外增殖的一般規(guī)律。群體倍增時(shí)間和克隆形成能力表明隨著代次提高，細(xì)胞增殖能力減弱。

3、通過細(xì)胞周期分析，發(fā)現(xiàn)G0/G1期的ADSCs所占的比率，隨著傳代次數(shù)的提升而提升，而S期的細(xì)胞比率逐漸減小。通過對ADSCs進(jìn)行了誘導(dǎo)分化，分別在不同誘導(dǎo)條件下分化為成骨細(xì)胞、脂肪細(xì)胞和肝樣細(xì)胞，經(jīng)過特異性染色、RT-PCR和免疫組織化學(xué)的證明，誘導(dǎo)形成的確實(shí)是目的細(xì)胞。驗(yàn)證了ADSCs的多向分化能力。
　　2.利用膠原酶Ⅱ和胰蛋白酶分離得到綿羊AMSCs，并在體外培養(yǎng)25代，主要呈現(xiàn)梭狀;經(jīng)RT-PCR和免疫組化檢測，細(xì)胞表達(dá)

4、CD29、Oct-4、CD71、CD44、Rex-1、CD90和CD73，分離培養(yǎng)的確實(shí)是羊膜來源的MSCs。通過流式細(xì)胞術(shù)分析，Oct-4、CD44、CD73和CD90在綿羊AMSCs中高表達(dá)。AMSCs經(jīng)歷潛伏期、對數(shù)期、穩(wěn)定期和衰亡期，生長曲線呈典型的“S”形，符合細(xì)胞在體外增殖的一般規(guī)律。群體倍增時(shí)間和克隆形成能力表明隨著代次提高，細(xì)胞增殖能力減弱。在體外對綿羊AMSCs進(jìn)行誘導(dǎo)分化研究，在適宜的體外條件下，通過特異性染色、RT

5、-PCR和免疫組織化學(xué)證明，綿羊AMSCs能分化成為成骨細(xì)胞、脂肪細(xì)胞和肝樣細(xì)胞，驗(yàn)證了AMSCs的多向分化潛能。
　　3.利用順鉑損傷小鼠肝臟，發(fā)現(xiàn)肝質(zhì)地變硬，形態(tài)改變，有散在出血點(diǎn)產(chǎn)生;查看切片發(fā)現(xiàn)其正常構(gòu)造被損害，纖維組織出現(xiàn)增生;血清學(xué)發(fā)現(xiàn)肝指標(biāo)均表現(xiàn)明顯的升高。將培養(yǎng)的ADSCs用熒光標(biāo)記，經(jīng)尾靜脈注射到小鼠體內(nèi)，發(fā)現(xiàn)ADSCs能定植到肝小葉中央靜脈周圍和肝小葉的結(jié)締組織中，組織切片觀察和血清學(xué)分析表明，ADSCs對肝損