應用基因芯片技術研究蘇丹紅Ⅰ對人外周血淋巴細胞基因表達的影響.pdf

1、蘇丹紅I(C.I.no.12055)屬于親脂性偶氮化合物，是一種人工合成的工業(yè)紅色染料，動物毒理學研究證明其具有毒性和致癌性，因此被各國明文禁止作為食品添加劑。但由于蘇丹紅I著色效果好，價格低廉等優(yōu)點，仍有商家將其用于食品著色。然而目前關于蘇丹紅毒性的大部分研究均基于動物細胞和染色體水平，并且在人體毒理方面的研究工作甚少。因此，蘇丹紅I的人體毒理學研究及其監(jiān)控得到國內(nèi)外的廣泛關注，成為環(huán)境毒理學研究的熱點問題之一。基因芯片因其具有能在轉(zhuǎn)

2、錄水平高通量、大規(guī)模、平行地處理大量基因的優(yōu)點，為環(huán)境毒理基因組研究提供了有力的工具。尤其是近來人類全基因組芯片技術的出現(xiàn)，使全面、綜合分析某些生命現(xiàn)象成為可能。本課題采用了人類全基因組芯片技術，分析蘇丹紅I對人外周血淋巴細胞的基因表達影響，探索其對人體的毒性和致癌作用。 采用MTT檢測技術，觀察不同濃度蘇丹紅I溶液對人外周血淋巴細胞生長的影響。結(jié)果顯示，隨著蘇丹紅I濃度的增加，體外抑制率增大；繪制生長抑制曲線，得到半數(shù)抑制濃

3、度IC<,50>(50％inhibitory concentrations，IC<,50>)，濃度為8.O×10<'-3>mol/L。 使用IC<,50>濃度的蘇丹紅I溶液處理淋巴細胞，分別提取和純化處理組及對照組淋巴細胞總RNA，并使用Cy5和Cy3分別對其進行熒光標記，混合后與美國西北大學研制的人類全基因組芯片(34，995個點)進行雜交。對雜交后芯片進行掃描和數(shù)據(jù)提取，采用總熒光強度標準化方法(TIN)對數(shù)據(jù)進行標準化，

4、篩選出差異表達基因，并使用ABI Panther在線分析工具對其進行分類分析。結(jié)果顯示，篩選出的487個差異表達基因中，306個基因表達上調(diào)，181個基因表達下調(diào)。差異表達基因主要包括癌基因，與細胞信號傳導、細胞增殖、循環(huán)、分化與凋亡、免疫與防御以及氧化代謝有關的基因等。FGFR、MYB、BIRC3等基因的差異表達，提示蘇丹紅I有誘發(fā)人類肝臟和膀胱等腫瘤的傾向?；贑YPlAl等差異基因的分析，初步對蘇丹紅I急性毒性暴露的生物標志進行了