神經(jīng)生長因子聯(lián)合間充質(zhì)干細胞治療大鼠腦損傷研究.pdf

1、背景：
　　 創(chuàng)傷性顱腦損傷(traumaticbraininjury,TBI)是神經(jīng)外科常見的疾病，發(fā)病率近年來逐漸上升。目前，在各種創(chuàng)傷性疾病中，創(chuàng)傷性顱腦損傷的致死率、致殘率均位居第一名。由于創(chuàng)傷性顱腦損傷而遺留的各種并發(fā)癥給患者家庭及社會帶來沉重的負擔(dān)。研究表明人臍帶間充質(zhì)干細胞移植對受損腦組織有一定的修復(fù)作用;神經(jīng)生長因子具有神經(jīng)元營養(yǎng)和促進軸突生長的作用。但兩者單獨使用效果并不理想。目前，國內(nèi)外對兩者聯(lián)合共同作用于腦

2、損傷大鼠的空間學(xué)習(xí)記憶能力的研究較少。本研究將人臍帶間充質(zhì)干細胞移植和神經(jīng)生長因子聯(lián)合共同用于腦損傷后空間學(xué)習(xí)汜憶能力的恢復(fù)。
　　 目的：
　　 觀察使用神經(jīng)生長因子聯(lián)合人臍帶間充質(zhì)干細胞移植對腦損傷大鼠行為學(xué)和空間學(xué)習(xí)記憶能力的影響，探討其對損傷腦組織的修復(fù)作用及其機制。
　　 材料與方法
　　 體外培養(yǎng)人臍帶間充質(zhì)干細胞，將傳至第3代的細胞濃度調(diào)整為1×109L-1。使用自由落體硬膜外撞擊法建立腦損

3、傷(TBI)模型。80只SD大鼠被隨機分為4組:A組為假手術(shù)組，B組為模型對照組、C組為人臍帶間充質(zhì)干細胞移植組、D組為細胞移植+神經(jīng)生長因子組，20只/組。在腦損傷后第3d，A組不作處理，B組經(jīng)尾靜脈注射1ml的磷酸緩沖液(PhosphateBuffersolution，PBS)，C組和D組經(jīng)尾靜脈注射1.0×109L-1的入臍帶間充質(zhì)干細胞1ml，并且D組大鼠術(shù)后當(dāng)天起每天都行腹腔注射NGF3μg/kg，持續(xù)14d。于細胞移植前及移

4、植后第7，14，21d對大鼠進行改良神經(jīng)損傷程度評分(mNSS)。在TBI后第23-27d進行Morris水迷宮(MorrisWaterMaze，MWM)實驗。在TBI后第28d，處死各組大鼠，觀察各組大鼠海馬齒狀回區(qū)5-溴脫氧尿嘧啶核苷(BrdU)免疫組化結(jié)果。并同時觀察膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)、神經(jīng)元特異性烯醇化酶(NSE)和神經(jīng)巢蛋白(Neuralnestprotein，Nestin)在腦組織中的表達情況。
　　 結(jié)果

5、：
　　 在大鼠顱腦損傷17d后，其神經(jīng)運動感覺功能的恢復(fù)表現(xiàn)出差異性，其mNSS評分結(jié)果為，A組神經(jīng)運動感覺功能正常為0分，B組(7.80±0.52)，C組(6.55±0.69)和D組(5.85±0.75)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。Morris水迷宮實驗顯示大鼠的平均潛伏期在笫2d起，C組和D組的差異明顯，其結(jié)果為，A組(31.1±3.91)，B組(56.80±4.84)，C組(44.25±4.36)和D組(39.7

6、7±5.69)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。在定向航行實驗結(jié)束4h后進行的空間探索實驗，穿越平臺次數(shù)結(jié)果為，A組(8.95±1.32)，B組(3.45±1.57)，C組(5.35±1.46)和D組(6.85±1.14)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。大鼠海馬齒狀回區(qū)BrdU陽性細胞數(shù)為A組未見，B組(3.55±1.79)，C組(14.50±4.12)和D組(21.20±3.78)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05）。受損腦組織中

7、，膠質(zhì)纖維酸性蛋白GFAP的面積百分比為，C組(4.08±1.14)，D組(5.16±1.26);神經(jīng)元特異性烯醇化酶陽性表達率顯示為C組(0.72±0.29)，D組(1.02±0.31);神經(jīng)巢蛋白的面積百分比為C組(1.23±0.26)％，D組(1.46±0.23)％;差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 人臍帶間充質(zhì)干細胞促進神經(jīng)元修復(fù)，改善腦損傷大鼠的行為能力及空間學(xué)習(xí)記憶能力，與神經(jīng)生長因子聯(lián)