水稻稻瘟病抗性基因Pita2候選基因功能的初步分析.pdf

1、稻瘟病是水稻生產(chǎn)上最具毀滅性的病害之一,嚴(yán)重影響水稻產(chǎn)量。開展稻瘟病新抗性基因的鑒定和研究對抗病育種具有重要的實際意義。稻瘟病新抗性基因Pita2比Pita抗譜更廣，為抗稻瘟病育種提供了一個新的抗源。本研究在Pita2精細(xì)定位和物理作圖的基礎(chǔ)上，為對該基因的候選基因進(jìn)行了預(yù)測注釋和表達(dá)分析，并且利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化對候選基因功能進(jìn)行了初步的分析，主要結(jié)果如下：
　　 1.利用公共數(shù)據(jù)庫中日本晴的參考序列，通過生物信息學(xué)軟件對

2、目的基因區(qū)域進(jìn)行了候選基因的預(yù)測注釋，結(jié)果表明，在目的基因區(qū)域共有10個候選基因，其中有5個基因編碼區(qū)僅100-200bp，因此選擇另外大小合適的5個基因作為該基因的候選基因，分別命名為：Pita2-1，Pita2-2，Pita2-3，Pita2-4，Pita2-5。本研究進(jìn)一步利用反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）技術(shù)對Pita2的這些候選基因進(jìn)行了表達(dá)分析，結(jié)果表明，5個候選基因中有2個基因在稻瘟病菌接種前后均不表達(dá)的，可能是假基因

3、，另外3個基因均表達(dá)，可能是有功能的基因。
　　 2.將5個候選基因中能從抗病品種PiNo.4擴(kuò)增出來的4個候選基因全長構(gòu)建功能互補(bǔ)載體，并對感病品種日本晴進(jìn)行遺傳轉(zhuǎn)化，對T0代的部分轉(zhuǎn)基因植株進(jìn)行稻瘟病菌研53-33孢子噴霧接種，結(jié)果發(fā)現(xiàn)Pita2-2和Pita2-5的轉(zhuǎn)基因植株抗病性與是否轉(zhuǎn)入插入片段沒有直接聯(lián)系，可能這兩個候選基因并不是Pita2的真實基因，繼續(xù)鑒定其他候選基因來找出Pita2。
　　 3.依據(jù)三個