柯里拉京在單純皰疹病毒性腦炎中的抗炎作用及機制研究.pdf

1、第一部分，目的：研究柯里拉京對HSV-1感染后小膠質細胞表達炎性細胞因子及炎性介質的影響。
　　 方法：小膠質細胞系BV2細胞接種HSV-1制造細胞模型，MTT法選擇合適的細胞用藥濃度，細胞分為正常對照組、HSV-1感染組、柯里拉京組(20ng/ml)、黃芪多糖組(100ug/ml)、地塞米松組(0.5ug/ml)。使用ELISA法檢測各組白細胞介素1β(IL-1β)、白細胞介素10(IL-10)、腫瘤壞死因子α(TNF-α)的

2、表達，采用Griess reagent NO試劑盒檢測NO表達。
　　 結果：病毒感染后，各細胞因子均明顯上升；柯里拉京干預后，小膠質細胞IL-1β、TNF-α及NO的表達與病毒組比較減少差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)，IL-10升高不顯著。
　　 結論：柯里拉京通過減少小膠質細胞促炎因子及炎性介質的分泌從而減緩病毒誘導的免疫炎性反應。
　　 第二部分，目的：研究柯里拉京干預對單純皰疹病毒(HSV-1)誘導的B

3、V2及PC12細胞凋亡的影響。
　　 方法：PC12細胞及小膠質細胞系BV2細胞接種HSV-1制造細胞模型，MTT法選擇合適的細胞用藥濃度，細胞分為正常對照組、HSV-1病毒感染組、柯里拉京組(20ng/ml)、黃芪多糖組(100ug/ml)、地塞米松組(0.5ug/ml)，采用流式細胞術檢測12、24、48h時間點各組BV2及PC12細胞的凋亡率。
　　 結果：1. BV2細胞被病毒感染后，細胞凋亡率顯著增加，與正常組

4、比較(P<0.05)；與病毒組比較， 柯里拉京組與地塞米松組細胞凋亡率顯著增加(P<0.05)；APS組對BV2細胞的凋亡影響較小，表現出其陰性對照的作用。12、24及48h時間點均顯示出相似的結果。2.病毒感染PC12細胞后，細胞凋亡率顯著增加，與正常組比較(P<0.05)；與病毒組比較， 柯里拉京組、地塞米松組及APS組細胞凋亡率降低(P<0.05)。48h時間點與24h顯示出相似的結果。而12h時間點各藥物組未顯示出明顯的抑制作用

5、。
　　 結論：柯里拉京可以促進HSV-1誘導的小膠質細胞系BV2的凋亡，并且能夠抑制病毒誘導的PC12細胞的凋亡。
　　 第三部分，目的：探討柯里拉京促進單純皰疹病毒(HSV-1)誘導的小膠質細胞凋亡途徑。
　　 方法：BV2細胞接種HSV-1制造細胞模型，MTT法選擇合適的藥物濃度，細胞分為正常對照組、HSV-1病毒感染組、柯里拉京組(20ng/ml)、黃芪多糖組(100ug/ml)、地塞米松組(0.5ug/

6、ml)，干預24h后流式細胞學檢測各組caspase-3、caspase-8、 caspase-9、 caspase-12的活性，Western-blot法檢測細胞色素C含量。
　　 結果：1.病毒感染BV2細胞后，caspase-3的表達顯著升高，與正常組相比(P<0.05)；與病毒組相比，柯里拉京組及地塞米松組表達水平顯著增高(P<0.05)；作為陰性對照，APS干預后caspase-3表達降低。2.病毒組與正常組比較cas

7、pase-8的表達率沒有明顯差異；與病毒組比較，柯里拉京組及地塞米松組caspase-8的表達率均明顯提高(P<0.05)；APS組仍然表現出陰性對照的作用，caspase-8的表達水平是降低的。3.與正常組相比較，病毒組caspase-9的表達率顯著升高(P<0.05)；而且柯里拉京組、地塞米松組及APS組caspase-9的表達率均比病毒組升高(P<0.05)；各組細胞色素C的表達與caspase-9表達的趨勢一致。4.與正常組比較

8、，病毒組caspase-12的表達沒有明顯的升高；地塞米松組與病毒組比較其表達也沒有明顯的差異；而柯里拉京組與病毒組比較caspase-12的表達顯著增加(P<0.05)；APS組與病毒組比較caspase-12也是顯著增加的(P<0.05)。
　　 結論：凋亡的三個主要途徑：線粒體途徑、死亡受體途徑及內質網途徑，在柯里拉京促進HSV-1誘導的小膠質細胞凋亡的過程中均發(fā)揮著重要的作用。而HSV-1誘導小膠質細胞凋亡主要是通過細胞

9、色素C及caspase-9介導的線粒體途徑來實現的。
　　 第四部分，目的：研究柯里拉京治療單純皰疹病毒性腦炎的可行性，為其臨床應用提供實驗依據。
　　 方法：Balb/c小鼠顱內注射HSV-1制造小鼠單純皰疹病毒性腦炎(herpes simplex encephalitis， HSE)模型，隨機分成5組：正常組、感染組、柯里拉京組(0.4mg/只)、地塞米松組(2ug/只)、黃芪多糖組(0.8mg/只)。采用ELISA

10、試劑盒檢測腦組織 TNF-a表達，硝酸還原酶法檢測NO含量，通過HE染色觀察腦組織形態(tài)學，TUNEL法觀察腦細胞的凋亡。
　　 結果：病毒感染后第四天：1. 感染組、柯里拉京組、地塞米松組及黃芪多糖(APS)組TNF-a表達較正常對照組明顯增加(P<0.01)；與感染組比較，柯里拉京組、地塞米松組TNF-a表達降低有統(tǒng)計學差異(分別為P<0.01、P<0.05)。2. 感染組、柯里拉京組、地塞米松組及黃芪多糖(APS)組NO表達