毒素清對肺炎痰熱證大鼠肺組織JAK STAT信號轉導通路的影響.pdf

1、目的：探討毒素清對肺炎痰熱證大鼠肺組織JAK/STAT信號轉導通路的影響，以揭示毒素清治療肺炎痰熱證的作用機制。
　　 方法：清潔級wistar大鼠70只，雌雄各半，2月齡，200±20g，按隨機數字表法分為5組，即正常組、肺炎組、肺炎痰熱證組、對照組、毒素清組，每組14只。采用氣管插管法制作細菌性肺炎模型，在細菌性肺炎模型基礎上給予熱環(huán)境風熱刺激建立細菌性肺炎痰熱證模型。毒素清組第7天開始給予毒素清水溶劑(2.8g·kg-·d

2、-1)灌胃，每日一次，連續(xù)5天；對照組第7天開始給予清金化痰湯合桑白皮湯中藥水煎劑(5 607g·k-1·d-1)港胃，每日一次，連續(xù)5天；正常組、肺炎組、肺炎痰熱證組第7天開始給予相同體積的生理鹽水灌胃，每日一次，連續(xù)5天。所有動物于風熱刺激開始第11天取材。光鏡下觀察大鼠病理形態(tài)學改變，采用免疫組化法測定各組肺組織IL-1、IL-6、IL-10、TNF-α的表達及JAK/STAT信號轉導通路相關蛋白p—JAK2、p—STAT1、p—

3、STAT3、SOCS3表達，采用RT-PCR法測定肺組織IL-1mRNA、IL-10mRNA及SOCS3mRNA表達水平。
　　 結果：
　　 1各組大鼠外周血白細胞(white blood cell，WBC)計數和中性粒細胞(polymorphonuelear neutropuk，PMN)百分比變化：肺炎組、肺炎痰熱證組WBC和PMN百分比均較正常組升高(P<0.01)。肺炎痰熱證組WBC計數和FMN百分比較肺炎組升高

4、(P<0.01，P<0.05)；毒素清組、對照組WBC計數和PMN百分比均低于肺炎痰熱證組(P<0.01，P<0.05)，毒素清組較對照組降低，但無顯著差異。
　　 2各組大鼠肺組織病理形態(tài)學改變；正常組大鼠肺組織結構正常。肺炎組細支氣管腔及肺泡腔內炎性滲出明顯，毛細血管擴張、充血、出血，中性粒細胞彌漫浸潤。肺炎痰熱證組細支氣管及肺泡腔膿性滲出明顯，肺泡結構破壞，間質水腫，毛細血管增生、擴張、充血。對照組細支氣管及肺泡腔內炎性滲

5、出明顯減少，間質輕度水腫，局部毛細血管擴張，充血，炎癥細胞散在分布。毒素清組肺組織結構基本正常，間質炎癥細胞浸潤。
　　 3各組大鼠肺組織IL-1β蛋白爰IL-1βmRNA表達的變化：與正常組比較，肺炎組與肺炎痰熱證組肺組織IL-1β蛋白及IL—1βmRNA的表達顯著增強(P<0.01)，其中，肺炎痰熱證組IL-1β蛋白及IL-1βmRNA的表達較肺炎組有增強的趨勢，但無統(tǒng)計學差異(P>0.05)：與肺炎痰熱證組相比，毒素清組與

6、對照組肺組織IL-1蛋白及IL-1βmRNA的表達明顯減弱(P<0.01)，其中，毒素清組較對照組IL-1蛋白及IL-1βmRNA的表達減弱明顯(P<0.05)。 4各組大鼠肺組織TNF表達的變化：與正常組比較，肺炎組與肺炎痰熱證組肺組織TNF表達顯著增強(O<0.01)，其中，肺炎痰熱證組肺組織TNF表達較肺炎組增強明顯(P<0.01)；與肺炎痰熱證組相比，毒素清組與對照組肺組織TNF表達明顯降低(P<0.01)，其中，毒素清組較對照

7、組肺組織TNF的表達降低顯著(P<0.05)。
　　 5各組大鼠肺組織IL-6表達的變化：與正常組比較，肺炎組與肺炎痰熱證組肺組織IL-6表達顯著增強(P<0.01)，其中，肺炎痰熱證組肺組織IL-6表達較肺炎組增強明顯(P<0.05)；與肺炎痰熱證組相比，毒素清組與對照組肺組織IL-6表達顯著降低(P<0.01)，其中，毒素清組較對照組肺組織IL-6表達降低明顯(P<0.05)。
　　 6各組大鼠肺組織IL-10蛋白及

8、IL-10mRNA表達的變化：與正常組比較，肺炎組與肺炎痰熱證組肺組織IL-10蛋白及IL-10mRNA的表達顯著增強(P<0.01)，其中，肺炎痰熱證組IL-10蛋白及IL-10mRNA的表達較肺炎組增高(P<0.05)；與肺炎痰熱證組相比，毒素清組肺組織IL-10蛋白及IL-10mRNA的表達明顯增強(P<0.05)。
　　 7各組大鼠肺組織p-JAK2、p-STAT1、p-STAT3蛋白表達的變化：與正常組比較，肺炎組和肺

9、炎痰熱證組肺組織p-JAK2、 p-STAT1、p-STAT3蛋白表達均顯著增強(P<0.01)，其中，肺炎痰熱證組較肺炎組增強明顯(P<0.05);與肺炎痰熱證組比較，毒素清組和對照組的上述蛋白表達均顯著降低(P<0.01)，其中，毒素清組鞍對照組降低更明顯(P<0.05)。
　　 8各組大鼠肺組織SOCS3蛋白及SOCS3mRNA表達的變化：與正常組比較，肺炎組和肺炎痰熱證組肺組織SOC83蛋白及SOCS3mRNA的表達顯著

10、增強(P<0.01)，其中，肺炎痰熱證組SOCS3蛋白及SOCS3mRNA的表達較肺炎組增強明顯(P<0.05);與肺炎痰熱證組比較，毒素清組和對照組肺組織SOCS3蛋白及SOCS3mRNA的表達水平均明顯提高(P<0.01)，其中，毒素清組表達水平均數較對照組升高，但無統(tǒng)計學意義。
　　 結論：
　　 1采用細菌性肺炎結合熱環(huán)境風熱刺激的方法成功制備細菌性肺炎痰熱證模型。該病證結合模型在白細胞反應、炎癥細胞因子表達及J

11、AK/STAT信號通路轉導方面有其自身的病理生理特點。
　　 2促炎性園子與抗炎性因子之間的失衡及JAK/STAT信號轉導通路參與了肺炎痰熱證的發(fā)生發(fā)展。
　　 3毒素清對肺炎痰熱證模型炎癥損傷具有明顯的保護作用，其機制可能為：
　　 ①直接抑制促炎因子TNF-α、IL-1β及IL-6的過度釋放。②促進抗炎因子IL-10的分泌，協調促炎反應與抗炎反應的平衡。③影響JAK/STAT信號轉導通路，繼而下調下游炎癥因子