核苷(酸)類似物抗HBV療效與患者外周血Treg比率及IFN-γIL-10關(guān)系的研究.pdf

1、研究背景：乙型肝炎病毒(Hepatitis B Virus，HBV) 慢性感染是一個(gè)全球性公共衛(wèi)生問題，嚴(yán)重危害人民的身體健康?？笻BV是治療慢性乙型肝炎（Chronic hepatitis B，CHB）的關(guān)鍵。核苷（酸）類似物如拉米夫定、阿德福韋酯及恩替卡韋等是臨床應(yīng)用廣泛的抗病毒藥物，這類藥物主要藥理機(jī)制是通過抑制HBV DNA 多聚酶活性，抑制病毒復(fù)制。然而，HBV能否被徹底清除，除依賴有效的抗病毒治療外，還依賴機(jī)體免疫應(yīng)答反應(yīng)。

2、臨床評價(jià)抗HBV 療效主要指標(biāo)不僅包括患者體內(nèi)HBV DNA 復(fù)制水平和ALT水平，而且還包括患者的免疫應(yīng)答反應(yīng)狀態(tài)。對于e抗原陽性患者，HBeAg 血清學(xué)轉(zhuǎn)換是抗病毒治療終點(diǎn)關(guān)鍵指標(biāo)，提示HBeAg 血清學(xué)轉(zhuǎn)換與機(jī)體抗病毒免疫應(yīng)答有關(guān)。CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（CD4+CD25+regulatory T cell，Treg)是目前所發(fā)現(xiàn)的最重要的專職免疫抑制性調(diào)節(jié)細(xì)胞，在病原體的慢性持續(xù)性感染過程中，起維持免疫耐受的作用。有研究

3、發(fā)現(xiàn)，CD4+CD25+Treg細(xì)胞與HBV 感染的慢性化有關(guān)。IFN-γ主要由活化的T細(xì)胞（包括Th0、Th1細(xì)胞和幾乎所有的CD8+T細(xì)胞）和NK細(xì)胞產(chǎn)生，介導(dǎo)體內(nèi)的炎癥反應(yīng)，在控制HBV 感染中起著重要作用；
　　 IL-10是一重要的免疫抑制因子，具有抑制NF-κ B 活性及其介導(dǎo)的炎性介質(zhì)分泌而阻止肝損傷作用，在HBV 感染的免疫耐受中起著重要作用。但是，目前為止，關(guān)于核苷（酸）類藥物治療對機(jī)體免疫應(yīng)答的影響的研究尚少

4、。本研究擬檢測核苷（酸）類似物抗病毒治療對CD4+CD25+Treg細(xì)胞和IFN-γ、IL-10的影響及CD4+CD25+Treg與細(xì)胞因子的相關(guān)性，探討核苷（酸）類藥物抗病毒治療療效與機(jī)體免疫功能的關(guān)系，為在核苷（酸）類似物抗病毒治療過程中，根據(jù)機(jī)體免疫應(yīng)答狀態(tài)進(jìn)行療效預(yù)測提供依據(jù)。
　　 目的：探討慢性乙型肝炎患者經(jīng)核苷（酸）類似物抗病毒治療，對HBeAg不同轉(zhuǎn)歸者外周血CD4+CD25+Treg細(xì)胞比率的影響；分析CD4+

5、CD25+Treg 比率變化與IFN-γ和IL-10表達(dá)水平的關(guān)系。
　　 方法：HBeAg 陽性的CHB患者103例，核苷（酸）類似物抗病毒治療104周后，發(fā)生病毒學(xué)應(yīng)答的94例患者：根據(jù)HBeAg 轉(zhuǎn)歸情況，將其分為HBeAg 未變化組52例，HBeAg/HBeAb 血清學(xué)轉(zhuǎn)換組28例，HBeAg 轉(zhuǎn)陰組14例。10例健康志愿者作為正常對照組。所有研究對象采集空腹靜脈血，分離單核淋巴細(xì)胞(PBMC)，應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測CD4

6、+CD25+FoxP3+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞占CD4+T細(xì)胞的比例；采用雙抗夾心ELISA 法檢測其血清IFN-γ、IL-10水平。采用ELISA 法檢測血清乙肝病毒標(biāo)記物，全自動(dòng)生化分析儀檢測ALT、AST、A/G、TBIL等肝功能項(xiàng)目，熒光定量PCR 法檢測HBV-DNA。
　　 結(jié)果：
　　 1.本組病例檢測結(jié)果顯示，患者外周血的CD4+CD25+Treg 比率高于正常對照組（P＜
　　 0.01），經(jīng)核苷（酸）類

7、似物抗病毒治療后CD4+CD25+Treg 比率較治療之前降低（P＜0.01），但仍高于正常對照組（P＜0.05）。
　　 2.根據(jù)治療后HBeAg 變化情況分組檢測結(jié)果顯示，HBeAg 未變化組的CD4+CD25+Treg比率顯著高于HBeAg/HBeAb 轉(zhuǎn)換組和對照組（P＜0.05），HBeAg 轉(zhuǎn)陰組CD4+CD25+Treg 比率較HBeAg 未變化組降低，但無顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05），HBeAg/HBeAb 轉(zhuǎn)

8、換組、HBeAg轉(zhuǎn)陰組和對照組CD4+CD25+Treg 比率無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。
　　 3.根據(jù)治療后HBeAg 變化情況分組檢測IFN-γ和IL-10水平結(jié)果顯示，HBeAg/HBeAb轉(zhuǎn)換組的IFN-γ表達(dá)水平高于HBeAg 未變化組和轉(zhuǎn)陰組（P＜0.05）；IL-10表達(dá)水平低于HBeAg 未變化組（P＜0.05）和HBeAg 轉(zhuǎn)陰組（但無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，P＞0.05）；HBeAg/HBeAb 轉(zhuǎn)換組、HBeA

9、g 未變化組及轉(zhuǎn)陰組的IFN-γ和IL-10水平均高于對照組（P＜0.05）。
　　 4.患者的CD4+CD25+Treg與IL-10呈正相關(guān)（P＜0.05），與IFN-γ呈負(fù)相關(guān)（P＜0.05）。
　　 結(jié)論：
　　 1.患者外周血的CD4+CD25+Treg 比率高于對照組，核苷（酸）類似物抗HBV 可使患者外周血CD4+CD25+Treg 比率降低，其中經(jīng)過治療，達(dá)到HBeAg/HBeAb 轉(zhuǎn)換或 HBeA

10、g 轉(zhuǎn)陰者，其比率可降至正常水平。表明核苷（酸）類藥物直接藥理作用機(jī)制，雖然是抑制HBV的復(fù)制，但它還可能通過降低CD4+CD25+Treg 比率調(diào)節(jié)機(jī)體的免疫應(yīng)答。
　　 2.核苷（酸）類似物抗HBV 治療后，HBeAg/HBeAb 轉(zhuǎn)換組，IFN-γ水平顯著高于HBeAg未變化組和轉(zhuǎn)陰組，而IL-10水平則低于未變化組和轉(zhuǎn)陰組；患者的外周血CD4+CD25+Treg比率與IL-10水平呈正相關(guān)，與IFN-γ呈負(fù)相關(guān)。結(jié)果提示