基于肺癆康聯(lián)合異煙肼對(duì)耐藥性結(jié)核小鼠肺、脾組織的影響探討肺癆康的增效作用.pdf

1、目的：通過肺癆康聯(lián)合異煙肼對(duì)耐藥性結(jié)核小鼠肺、脾組織的影響，探討肺癆康治療耐藥性結(jié)核的增效作用。
　　方法：基于前期實(shí)驗(yàn)研究，采用尾靜脈注射耐異煙肼結(jié)核分枝桿菌懸液建立耐異煙肼結(jié)核小鼠模型，注射H37RV標(biāo)準(zhǔn)結(jié)核分枝桿菌懸液建立標(biāo)準(zhǔn)結(jié)核小鼠模型。本實(shí)驗(yàn)共120只SPF級(jí)昆明種小鼠，雌雄各半，隨機(jī)分為6組，耐異煙肼結(jié)核小鼠模型4組，分別予以0.9％氯化鈉注射液（模型組）、1%的異煙肼水溶液（異煙肼組）、1g/ml肺癆康水煎液（肺癆康

2、組）、肺癆康聯(lián)合異煙肼藥液（聯(lián)合組）進(jìn)行干預(yù)；標(biāo)準(zhǔn)結(jié)核小鼠模型（標(biāo)準(zhǔn)菌株組）1組予0.9%氯化鈉注射液灌胃；空白組為未種菌的SPF級(jí)健康小鼠。每周稱重一次，連續(xù)灌胃56天后處死小鼠，取出小鼠肺和肝、脾組織行病理檢查；取出小鼠部分肺組織，做細(xì)菌培養(yǎng)，將培養(yǎng)出來的結(jié)核菌進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)，將結(jié)核菌滅活進(jìn)行DNA的分離提純，用全基因重測(cè)序的方法，對(duì)結(jié)核桿菌基因組DNA進(jìn)行重測(cè)序，以標(biāo)準(zhǔn)菌株（H37RV）為參考序列，篩選出與ahpC基因相關(guān)的突變位點(diǎn)

3、,進(jìn)行對(duì)比分析。
　　結(jié)果：①聯(lián)合組小鼠，精神狀態(tài)較好，表現(xiàn)為反應(yīng)較靈敏，動(dòng)作較靈活，被毛較光澤；營(yíng)養(yǎng)狀況良好，表現(xiàn)為皮膚有彈性、色粉紅，肌肉豐碩，體格較狀，其體重增加明顯大于肺癆康組、異煙肼組、模型組、標(biāo)準(zhǔn)菌株組和空白組（P＜0.05）；肺癆康組的小鼠，精神狀態(tài)較差逐漸出現(xiàn)反應(yīng)稍遲鈍，動(dòng)作稍遲緩，被毛無光澤，營(yíng)養(yǎng)狀況欠佳，表現(xiàn)為皮膚發(fā)紫、彈性較差、皮溫正常，形體偏瘦，但無肋骨外露，體重增加明顯大于模型組、標(biāo)準(zhǔn)菌株組及空白組（P＜

4、0.05）；異煙肼組的小鼠，精神狀態(tài)較差表現(xiàn)為反應(yīng)稍遲鈍，動(dòng)作稍遲緩，被毛無光澤，營(yíng)養(yǎng)狀況欠佳表現(xiàn)為皮膚發(fā)紫、彈性較差、皮溫正常，形體偏瘦，但無肋骨外露，其體重增加幅度與肺癆康組的體重增加幅度無明顯差異（P＞0.05）；空白組的小鼠精神狀態(tài)好表現(xiàn)為反應(yīng)靈敏，動(dòng)作靈活，被毛光澤，營(yíng)養(yǎng)中等表現(xiàn)為體格健壯，皮膚有彈性，肌肉豐碩，其體重增加幅度明顯大于模型組和標(biāo)準(zhǔn)菌株組（P＜0.05）。②肺癆康組與模型組相比，肺組織和脾組織損傷程度明顯較輕（P

5、＜0.05），肝組織損傷也有所減輕，但差異不明顯，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。異煙肼組與模型組相比，肺組織和脾組織損傷程度明顯較輕（P＜0.05），肝組織損傷也有所減輕，差異不明顯，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。聯(lián)合組與模型組相比，肺組織和肝組織損傷程度明顯較輕（P＜0.05），脾組織損傷程度較模型組輕，差異不明顯，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。肺癆康組與異煙肼組相比，肺組織和肝組織損傷程度較輕（P＜0.05），脾組織損傷程度無明顯差

6、異（P＞0.05）。肺癆康組與聯(lián)合組相比，肺組織、肝組織和脾組織損傷程度均無明顯差異（P＞0.05）。異煙肼組和聯(lián)合組相比，肺組織損傷程度較重（P＜0.05），肝組織損傷程度無明顯差別（P＞0.05），脾組織損傷程度較輕（P＜0.05）。③肺癆康組與模型組相比，小鼠肺組織研磨液稀釋10倍和100倍培養(yǎng)出來的結(jié)核分枝桿菌數(shù)均明顯較少（P＜0.05）。異煙肼組與模型組相比，小鼠肺組織研磨液稀釋10倍和100倍培養(yǎng)出來的結(jié)核分枝桿菌數(shù)均明顯較

7、少（P＜0.05）。聯(lián)合組和模型組相比，小鼠肺組織研磨液稀釋10倍和100倍培養(yǎng)出來的結(jié)核分枝桿菌數(shù)均明顯較少（P＜0.05）。肺癆康組和異煙肼組相比，小鼠肺組織研磨液稀釋10倍和100倍培養(yǎng)出來的結(jié)核分枝桿菌數(shù)，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。肺癆康組和聯(lián)合組相比，小鼠肺組織研磨液稀釋10倍和100倍培養(yǎng)出來的結(jié)核分枝桿菌數(shù)均明顯較多（P＜0.05）。異煙肼組與聯(lián)合組相比，小鼠肺組織研磨液稀釋10倍培養(yǎng)出來的菌落數(shù)較多，但差異無統(tǒng)

8、計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），稀釋100倍培養(yǎng)出來的菌落數(shù)均明顯較多（P＜0.05）。④7個(gè)堿基突變位點(diǎn)的ahpC基因?qū)?yīng)的密碼子和氨基酸均未發(fā)生改變。肺癆康組和肺癆康聯(lián)合異煙肼組的突變位點(diǎn)2729621，對(duì)應(yīng)的密碼子Gcc→Tcc，氨基酸由丙氨酸變?yōu)榻z氨酸。
　　結(jié)論：①采用小鼠尾靜脈注射法建立耐異煙肼結(jié)核小鼠模型和標(biāo)準(zhǔn)結(jié)核小鼠模型成功。②肺癆康能顯著提高耐異煙肼結(jié)核小鼠體重的增長(zhǎng)幅度（P＜0.05），改善小鼠的精神狀態(tài)及營(yíng)養(yǎng)狀況。