家蠶桿狀病毒晚期表達因子LEF-10的功能研究.pdf

1、桿狀病毒晚期基因表達因子(lateexpressionfactors，LEFs)是一類調控病毒晚期基因表達的蛋白因子，編碼這些蛋白因子的基因統(tǒng)稱為lef基因。有些lef基因是病毒DNA復制的必需基因或促進基因，有些是在轉錄水平行使調控功能的基因。所有的lef基因都能調控晚期基因的表達，是晚期基因表達的必需因子。
　　 在桿狀病毒基因組上敲除目的基因被公認為是研究病毒基因功能的精確、有效的手段，特別是研究目的基因在整個感染周期中對

2、病毒DNA復制和基因轉錄的調控作用。家蠶桿狀病毒(BmNPV)中的LEF-10與其他晚期表達因子不具有顯著的同源性，一般被認為是一種在轉錄過程中的輔助因子，但有關其在病毒復制繁殖中的作用機制還不清楚。在本研究中，我們通過Red重組系統(tǒng)敲除了BmNPV的lef-10基因，構建lef-10缺失型Bacmid，再將lef-10啟動子和lef-10基因利用Bac-to-Bac系統(tǒng)重新補回到病毒基因組中。將構建的缺失型病毒DNA轉染BmN細胞，經

3、檢測病毒滴度為零，而補回型重組病毒恢復到與野生病毒相似的感染水平，表明lef-10為BmNPV復制裝配的必需基因。為了進一步了解LEF-10的作用機制，我們研究了lef-10缺失型Bacmid轉染細胞后病毒基因組的復制情況以及病毒早期、晚期和極晚期基因的轉錄和表達情況。結果表明lef-10缺失后，病毒基因組的復制水平始終保持在較低水平;病毒早期基因lef-3、晚期基因vp39和極晚期基因p10的轉錄水平均明顯低于野生型和補回型重組病毒;