蛋白酶體低活性對Nanog陽性肝癌干細(xì)胞“干性”維持的作用機(jī)制研究.pdf

1、浙江理工大學(xué)學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得浙江理工大學(xué)或其他教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過的材料。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說明并表示謝意。學(xué)位論文作者簽名：拯洲溯簽字日期：秒，籮年；月，歲IL7浙江理工大學(xué)碩士學(xué)位論文蛋白酶體低活性對Nanog陽

2、性肝癌干細(xì)胞“干性”維持的作用機(jī)制研究摘要肝癌是死亡率僅次于胃癌、肺癌的第三大常見惡性腫瘤，肝癌的發(fā)病率在全世界居惡性腫瘤的第五位，也是我國常見的惡性腫瘤之一。手術(shù)以及放化療是目前治療腫瘤的主要方法，但是病人生存率并不理想。腫瘤干細(xì)胞是一群具有自我更新和多向分化潛能的細(xì)胞，大量研究指出它的存在是腫瘤患者難治愈，預(yù)后差的關(guān)鍵。蛋白酶體在多種干細(xì)胞中，均處與低活性狀態(tài)，并與其維持細(xì)胞“干性”相關(guān)。本文利用以Nanog啟動子驅(qū)動GFP表達(dá)的分

3、選系統(tǒng)，分選得到GFppos以及GFpneg細(xì)胞，即NanogPos肝癌干細(xì)胞以及Nanogneg非肝癌干細(xì)胞。在此基礎(chǔ)上，檢測兩群細(xì)胞中蛋白酶體活性水平，以及各種蛋白酶體組分的蛋白水平以及RNA水平，結(jié)果顯示在NanogPos肝癌干細(xì)胞中蛋白酶體活性呈下調(diào)。由于蛋白酶體成熟蛋白POMP可作為提示蛋白酶體活性水平的指標(biāo)，我們通過改變細(xì)胞內(nèi)POMP的表達(dá)水平，檢測細(xì)胞自我更新能力，包括細(xì)胞球形成能力以及克隆形成能力。進(jìn)一步研究這種活性的變

4、化對于細(xì)胞維持其“干性”的影響。研究顯示，下調(diào)POMP可導(dǎo)致細(xì)胞自我更新能力明顯增強(qiáng)，而反之亦然。改變細(xì)胞內(nèi)POMP表達(dá)水平后，Nanog的RNA表達(dá)水平以及蛋白水平也相應(yīng)的發(fā)生改變，說明Nanog是蛋白酶體影響“干性”的下游靶基因。通過啟動子熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)，以及ChIP實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，蛋白酶體活性影響Nanog啟動子的活性，進(jìn)一步的研究發(fā)現(xiàn)Smad3以Smad3L磷酸化形式結(jié)合Nanog的啟動子。蛋白酶體活性降低可提高Smad3L的表達(dá)水