重組大腸桿菌(BL21)產(chǎn)海藻糖合酶過程優(yōu)化.pdf

1、海藻糖是一種特殊的二糖，具有良好的生物學功能，有較好的保濕功能、抗干旱功能、耐滲透壓等性質，因此在食品、醫(yī)藥、化妝品、農(nóng)業(yè)等領域得到廣泛應用，并具有較好的安全性。目前有海藻糖葡糖基轉移合成酶（呦TreT）途徑、海藻糖合酶（TreS）途徑、6-磷酸海藻糖合成酶/6-磷酸海藻糖磷酸酯酶（TPS/TPP）途徑和麥芽寡糖基海藻糖合成酶/麥芽寡糖基海藻糖水解酶（TreY/TreZ）途徑是被發(fā)現(xiàn)的生成海藻糖的途徑，其中TreS途徑被認為是最具優(yōu)勢的

2、途徑，因為海藻糖合酶能夠將價格低廉的麥芽糖通過一步反應轉化生成海藻糖，成本低，工藝簡單，而且符合工業(yè)生產(chǎn)設計。
　　研究表明，海藻糖合酶原始菌株產(chǎn)酶少，相對酶活低，不能滿足工業(yè)化設計要求，因此通過基因工程技術手段，將獲取的海藻糖合酶基因克隆并進行異源表達，這種方法已成為獲得海藻糖合酶的一種重要方式，更加有利于海藻糖合酶的獲得。在以往的研究報道中，有許多的來自不同菌種的海藻糖合酶基因因被克隆，并轉化至大腸桿菌中得到了表達，進而獲得了

3、海藻糖合酶。但研究發(fā)現(xiàn)相關報道所構建的重組大腸桿菌很少應用于規(guī)?；I(yè)生產(chǎn)。
　　本文構建了海藻糖合酶基因質粒載體 pET22b-tres，并被轉化至大腸桿菌Escherichia coliBL21（DE3）中進行高效的的表達。用乳糖誘導重組菌的表達，通過研究確定最適濃度為4g/L，重組菌中海藻糖合酶的表達量占總蛋白的比重較高。使用 Ni柱對重組海藻糖合酶粗酶液進行純化，得到純酶液，并對其進行酶學性質的研究，結果表明該海藻糖合酶在