蕓薹屬查爾酮異構(gòu)酶基因家族的克隆與功能鑒定.pdf

1、U n i v ersityC o d e : 10 6 3 5S tu d e n tN u m b e r : 1 1 2 0 0 8 3 2 6 0 0 2 1 6 4D isse rtatio nfo rM a ste r， 5D e g re eo fS o u th w e stU n iv e rsityC lo n in ga n dF u n e tio n a lId e n tif i e a tio no f〔

2、流 a l e o 刀eI s o m 召 ra s 召G e n eF a m ilie Sf r o mB ra ss ie aS P e c ie sM a ste r， 5d e g re ee an d id ate : T in 只 C a o‘. 尸 ， . . . .S u P erv iso r :Yo u 一 R o n gC h a i， P h . D . ， P ro fe sso rS P e eialty

3、:B io eh elnistr yan dM o leeu larB io lo g yD ire c tio n : P la n tG e n e tieE n g in e e rin ga n dB io te e hn o lo g yC h o n g q in g · C h in aJ u n e ， 2 0 1 13. 9. 8 測(cè) 序 及 引物 合 成 . . . . . . . . . . . . .

4、. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……173 .10 甘 藍(lán) C 乃 ?；?因家 族 的 S outhem 雜 交 分

5、 析 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……173 .10 .1 探 針 制 備 ， ‘ . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

6、. . . . . . . . . . .. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……173 .10. 2 基 因組 總 D N A 的 限 制 性 酶 切 消 化 . . . . . . .

7、 ……， …， ， …， . . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . . . . . . . . . . . . . . . ……， . . . ……183.10 . 3Southem 雜 交 凝 膠 電泳 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

8、 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . … …183.10. 4Southem 雜 交凝 膠 轉(zhuǎn) 膜 及 固定. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

9、. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……193 .10. 5 探 針 與 尼 龍 膜 的 Southern 雜交 和 檢 測(cè) . . …， .3.10. 6 剝離 探 針 . . . . . · · · · · · · · · · · · · &

10、#183; · · · · · · · · · · ……“ . “ . ’ . ’ “ “ ’ ‘ ” “ 二3 .1] 核 酸 和 蛋 白序 列 的 結(jié) 構(gòu) 和 功 能 的 生 物 信 息 學(xué) 分 析3.11.1B n C H I、3 .12 甘 藍(lán) 型 油 菜 、B rC H I 和 B oC H I 蛋 白的系統(tǒng) 發(fā)育 分析 . .

11、 …白菜 、甘 藍(lán) C 萬Z 基 因家 族 的 R T-P C R 分 析3.12.1R N A 的 反轉(zhuǎn) 錄 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . · · · · · · . . . ·

12、 · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · &#

13、183; · · · · · · ……3.12. 2 內(nèi)標(biāo) 檢 測(cè)與 cD N A 濃 度 調(diào)節(jié) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……， 二 ， . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

14、 . . . ……3.12 . 3 甘 藍(lán) 型 油菜 、 白菜 和 甘 藍(lán) 〔 萬Z基 因半 定量 R T-P C R 的 引 物 和 檢 測(cè) 溫 度 . . . . . . . ……3.12. 4 不 同組 織 器 官 中 C 五 萬基 因 家族 各 成 員 表 達(dá) 模 式 的半 定 量 R T-P C R 檢 測(cè) . . . . . . . . . ……3‘ ]2. 5C H I基 因家族 在 黃 、黑籽 系 間的表 達(dá) 差異 性檢

15、 測(cè) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……， . …‘ . . . . . ……“ 二3.13 蕓 蔓 屬 C 無 叮基 因 家 族 R N Ai 載 體 的構(gòu) 建 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……， . . . .

16、. . . . . . . . . . . . ……3.13.1RN Ai 載 體 構(gòu) 建 所 用 引物 · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · ·

17、 · · · · · · · · · · · · · · · · · ……’ “ ‘ . ” ” ” ” ” ” ’ “ “ . “ 二 ” ’ 二 “ . ’ . ’ “ “ ” ‘3.13. 2 蕓 蔓 屬 C H I 基 因 家 族 R N Ai 片 段 的 克

18、隆 . . . . . . . . . . .. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . …… ， . . . . . . . . ……3 .13. 3 載 體 骨 架 的 制 備 和 反 義 片 段 的插 入 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

19、. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……3.13. 4 中 間載 體 的 酶 切 和 正 義 片 段 的插 入 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

20、. . . . . . . . . . ……3.13. 5RN Ai 載 體 轉(zhuǎn) 化 根 癌 農(nóng) 桿 菌 · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · ·

21、 · · · · · · · · · · · · · · · · · · · ……‘ ……” “ ’ ‘ ’ “ . “ . ‘ ’ “ ” ” ” ” ” ” ” ‘3 .14 蕓 蔓 屬 C 乃 ?；?因 家 族 正 義 植物 表 達(dá) 載 體 的

22、構(gòu) 建 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . . . . . . . . . . ……3， 14 .1 蕓 蔓 屬 C 月Z 基 因 家 族 正 義 片段 和 植 物 表 達(dá) 載 體 骨 架 的 制 各 . . . . . . . . . . . . . . … …， ， . . . .

23、 . ……3.14. 2 正 義植物 表 達(dá) 載 體 的構(gòu) 建 與鑒 定 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……3 .巧 甘 藍(lán) 型 油 菜 C 乃 ?；?因 家 族 R N Ai 載

24、體 的 遺 傳 轉(zhuǎn) 化 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……3.巧.1 發(fā) 無 菌 苗 . . ……3.巧. 2 預(yù) 培 養(yǎng) . . . . . . ……3.巧. 3 侵 染 與 共 培 養(yǎng).4 殺 農(nóng) 桿 菌 (洗 外 植 體 ) 與 誘 導(dǎo)抗 性

25、愈傷. 5 分 化 培 養(yǎng) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……， . . . . . . . . . . ……. 6 分 化 莖 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……C J ， f ︸ ︸ 、

26、︸ 1 . . 且 ， . . J 月 . 月 且 …內(nèi) j 內(nèi) j ， j莖 氏 3.15 . 73. 巧 . 8 生根 . . …， ……3.15. 9 習(xí) } } 化 及 移 栽3.16 再 生植株 的分子 檢 測(cè) 和 性 狀 初 步 鑒 定3.16 .1B asta 復(fù) 檢 . . . . . . . . ……， . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

27、. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……3.16. 2 P C R 檢 測(cè) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

28、……， ……3.16、 3 性 狀 調(diào) 查 . . . . . . . . . . . . . . . ……， 二 ， . . . . ……‘ 、 . …， . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……第 四章 結(jié) 果 與 分 析 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

29、. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……4 .1 各 器 官 組 織 總 R N A 的 提 取 和 總 cD N A 的獲 得 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……4.1

30、.1 白菜 、甘 藍(lán) 、甘 藍(lán) 型 汕 菜 各 器 官 組 織 R N A 的提 取 . . . . . . . . ……4 .1. 2 甘 藍(lán) 型 汕 菜 、 白菜 、甘 藍(lán) 生 殖 器 官 R A C E 總 cD N A 的 獲 得4.2 甘 藍(lán) 型 油 菜 、 白菜 、 甘 藍(lán) 基 因 組 總 D N A 的提 取4. 3 丑 rT 乃 、丑 oC 無 叮 、刀 ， :了 乃 基 因家族 go N A 的克 隆 .4 . 4 白

31、菜 、甘 藍(lán) 、甘 藍(lán) 型 油 菜 C 五 汀基 因家 族 全 長(zhǎng) cD N A 的 克 隆 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……引， 、 ︼ ， J I ﹃ j 乃 、 ︼ 月 斗 4 . 5 及 丁 萬 、B oT 乃 、B nC華 廳基 因 家 族 核酸 水 平 的分 析 二4. 5.I B]月 獷 萬

32、、B o T 乃 、B nC 無 U 基 因家族 的基 因 結(jié) 構(gòu) 和 核 酸 特 征 …， . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ……4 . 5. 2B rC 去 U 、B O C 乃 U 、B17C 無 U 基 因家 族 核 苔 酸 水 平 同源 性 和 進(jìn) 化 關(guān) 系 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .