Smad1在糖尿病大鼠腎臟中的表達及作用.pdf

1、目的：糖尿病腎病是全球終末期腎臟病的最常見病因，嚴重危害人類的健康。糖尿病腎病的基本病理改變?yōu)槟I小球肥大、基底膜增厚及系膜基質(zhì)聚集，最終導(dǎo)致腎小球硬化。近年來，Smads蛋白超家族在腎小球硬化方面的作用受到國內(nèi)外學(xué)者的關(guān)注。本實驗通過觀察Smad1在糖尿病大鼠腎組織中的表達，探討Smad1與腎小球系膜基質(zhì)積聚的關(guān)系，并通過觀察AT1受體拮抗劑對Smad1表達的影響，探討其在延緩腎臟纖維化中的可能作用機制。
　　 方法：隨機選取S

2、D大鼠64只，分為對照組16只、糖尿病組24只及用藥組24只。使用鏈脲佐菌素(STZ，55mg/kg)腹腔注射，誘發(fā)大鼠糖尿病動物模型，正常對照組大鼠予等量檸檬酸緩沖液腹腔注射。用藥組大鼠自第3周起予奧美沙坦(0.6mg/kg)灌胃治療，其他大鼠給予等量生理鹽水灌胃處理。分別于3周、4周、12周及20周處死大鼠，測定糖化血紅蛋白、血肌酐及腎重指數(shù)，并留取24小時尿量，測定尿肌酐及尿白蛋白，留取腎組織標(biāo)本送檢，分別進行電鏡觀察，PASM、

3、PAS及Masson染色光鏡下病理觀察。并采用免疫組織化學(xué)、Western blot方法檢測腎臟ColⅣ和Smad1蛋白的表達，RT-PCR方法檢測腎組織ColⅣ和Smad1mRNA的表達，并采用病理圖像分析軟件(美國Image-Pro Plus6.0)進行相關(guān)性分析。
　　 結(jié)果：1．隨著病程延長，糖尿病組大鼠的糖化血紅蛋白(HBA1c)、血肌酐(SCr)、腎重指數(shù)、24h尿蛋白均呈上升趨勢。其中糖尿病組各時間點的糖化血紅蛋白

4、、24小時尿量及24小時尿蛋白較對照組明顯升高(p＜0.05，p＜0.01)，示糖尿病動物模型成功。
　　 2．免疫組化顯示，糖尿病大鼠Smad1主要表達于腎小球系膜區(qū)，腎小管略有表達，而對照組表達很少。Western blot結(jié)果示3周時糖尿病組Smad1在蛋白水平的表達量較對照組升高16倍(p＜0.01)，20周時用藥組與糖尿病組相比降低8.3倍(p＜0.05)。RT-PCR結(jié)果顯示，20周時用藥組大鼠腎組織Smad1的mR

5、NA表達較糖尿病組降低1.7倍(p＜0.05)。結(jié)果證實，糖尿病大鼠腎組織Smad1表達明顯增高，奧美沙坦可下調(diào)其表達水平。
　　 3．免疫組化顯示，對照組腎小球基底膜和系膜區(qū)ColⅣ有表達，而糖尿病大鼠表達明顯增加，且隨著病程延長呈上升趨勢。RT-PCR結(jié)果顯示20周時用藥組大鼠腎組織ColⅣ的mRNA表達較糖尿病組降低2.3倍(p＜0.05)。
　　 4．Western blot及免疫組化還顯示，自3周起，糖尿病組大

6、鼠腎組織Smad1在蛋白水平表達較對照組開始升高，此時24小時尿蛋白排泄量也增高。又經(jīng)病理圖像分析軟件(美國Image-Pro Plus6.0)結(jié)果顯示，Smad1蛋白與ColⅣ的表達量顯著相關(guān)(r=0.68，p＜0.01)，而尿蛋白量與ColⅣ的相關(guān)性相對較弱(r=0.45，p=0.043)。
　　 結(jié)論：1．糖尿病大鼠腎組織Smad1表達的變化提示，Smad1參與糖尿病腎病的發(fā)生發(fā)展，且Smad1將可能成為糖尿病腎病早期診斷