他克莫司對血小板功能影響的體外研究.pdf

1、【目的】
　　觀察他克莫司（Tacrolimus，F(xiàn)K506）在體外對血小板功能的影響。
　　【方法】
　　收集18-25歲、兩周內(nèi)未服用任何藥物的健康志愿者的空腹新鮮靜脈全血，分離得到洗滌血小板及富含血小板血漿（Platelet rich plasma, PRP）。洗滌血小板（3×108/ml）與不同濃度他克莫司或者陰性對照二甲基亞砜（Dimethyl sulfoxide, DMSO）于37℃孵育2小時，使用流式細(xì)胞

2、儀檢測血小板線粒體跨膜電位（Mitochondrial inner transmembrane potential,ΔΨm）變化、血小板活化指標(biāo) P-選擇素（P-selectin）的結(jié)合率。使用 Western Blot檢測他克莫司與正常人洗滌血小板孵育后的血小板促凋亡蛋白 Bax，抗凋亡蛋白 Bcl-2、Bcl-XL的表達(dá)和Caspase-3的活化情況。同時我們研究了他克莫司對不同致聚劑誘導(dǎo)的血小板聚集功能的影響，探討他克莫司是否損傷

3、血小板功能，將洗滌血小板與他克莫司（0.06μM）或陰性對照（DMSO）于37℃孵育2小時后，洗滌血小板中分別加入膠原（Collagen,5μg/mL）、凝血酶（Thrombin,0.1 U/mL）、瑞斯托霉素（Ristocetin,1.25 mg/mL），1000 rpm剪切力的情況下，使用血小板聚集儀檢測血小板聚集程度。
　　【結(jié)果】
　　1.臨床限制濃度下的他克莫司不會誘導(dǎo)血小板凋亡
　　體外研究結(jié)果顯示，與正常

4、陰性對照相比，臨床限制濃度下的他克莫司不會誘導(dǎo)血小板ΔΨm去極化，血小板抗凋亡蛋白 Bcl-2、Bcl-XL無變化，他克莫司的濃度增高2000倍才檢測到線粒體膜電位下降及Caspase-3活化裂解。以上實(shí)驗結(jié)果表明，在臨床限制藥物濃度的情況下，他克莫司不會誘導(dǎo)血小板發(fā)生凋亡。
　　2.他克莫司對不同刺激劑誘導(dǎo)的血小板聚集功能的影響，因刺激劑不同而異
　　既往研究證明，他克莫司可影響二磷酸腺苷（Adenosine diphos

5、phate，ADP）、膠原蛋白、瑞斯托霉素誘導(dǎo)的全血及 PRP中血小板的聚集功能，然而，在洗滌血小板中，他克莫司是否影響血小板聚集功能還不清楚。我們通過研究表明，他克莫司能加強(qiáng)膠原誘導(dǎo)的血小板聚集，抑制凝血酶誘導(dǎo)的血小板聚集，對瑞斯托霉素及血管性血友病因子（Von willebrand factor，VWF）誘導(dǎo)的血小板聚集無明顯作用，提示不同刺激劑對他克莫司誘導(dǎo)的血小板的聚集功能有不同的影響。
　　【結(jié)論】
　　綜上所述，