甘藍型油菜小孢子培養(yǎng)技術及其與異源六倍體油菜有關生理特性研究.pdf

1、油菜是我國重要的油料作物，隨著人民生活水平的提高，迫切需要高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)的油菜新品種滿足人們對于健康菜籽油的需求。本試驗以兩個四倍體甘藍型油菜常規(guī)品種、一個人工合成異源六倍體油菜品系為材料，分析了甘藍型油菜小孢子胚胎發(fā)生及植株再生影響因素;觀察了甘藍型油菜小孢子胚胎發(fā)生過程;對小孢子再生植株進行染色體加倍并檢測其倍性;比較了甘藍型四倍體油菜與六倍體油菜不同時期生理指標。通過以上研究，以期為探索油菜育種提供新的種質(zhì)資源，主要試驗結果如下:

2、>　　 1.本試驗研究了不同因素對兩個甘藍型油菜品種浙雙758和浙雙72的小孢子出胚率和胚狀體成苗率的影響。試驗結果表明，當供體花蕾長度為3.5～4.5mm、小孢子分離后32℃熱擊暗培養(yǎng)2d轉(zhuǎn)入25℃下培養(yǎng)，具有較高的出胚率;4℃低溫預處理抑制小孢子的胚胎發(fā)生;NLN培養(yǎng)基中加入1 mg/L的6-BA、100 mg/L的PEG能促進小孢子的胚胎發(fā)生，加入0.1 mg/L的2，4-D效果不明顯;接種到固體分化培養(yǎng)基上的小孢子胚胚齡對胚狀

3、體出苗率有顯著的影響，以4周胚齡、即子葉期的胚狀體出苗率最高，浙雙758和浙雙72兩品種分別達到84.2％和81.5％;當固體分化培養(yǎng)基中瓊脂濃度為15g/L時，兩個品種的小孢子胚狀體出苗率均為最高，分別達到81.0％和79.2％。
　　 2.觀察甘藍型油菜小孢子胚胎發(fā)生過程發(fā)現(xiàn)，游離小孢子培養(yǎng)1～5 d內(nèi)，隨著培養(yǎng)時間的延長，小孢子的存活率迅速下降。部分小孢子培養(yǎng)后細胞膨大，大多數(shù)膨大的細胞不能分裂或分裂后停止發(fā)育或發(fā)育異常，

4、極少一部分小孢子膨大后開始分裂，并沿2-細胞、4-細胞、多細胞原胚、球型胚、心型胚然后發(fā)育成魚雷型胚，最終形成肉眼可見的子葉型胚。
　　 3.利用流式細胞儀對2個甘藍型油菜和六倍體油菜以及小孢子再生植株在苗期（取新長出的葉片幼嫩組織）進行染色體倍性檢測，其矩形圖上清晰地檢測出單倍體、雙單倍體、四倍體、六倍體以及一些嵌合體的分離峰。結果表明，再生植株主要為單倍體和自發(fā)二倍體。
　　 4.通過比較甘藍型四倍體油菜與六倍體油菜