微波輔助-多相溶劑體系萃取分離農吉利中有效成分的研究.pdf

1、農吉利（Crotalaria sessiliflora L.）是豬屎豆屬植物野百合的干燥全草，具有利濕、清熱、解毒的功能。在我國廣泛應用在多種疾病如耳聾，耳鳴，頭目暈眩及各種癌癥如食管癌、宮頸癌、皮膚癌等的治療。農吉利中主要含有生物堿和黃酮等有效成分。傳統(tǒng)的提取分離方法如熱回流提取，冷浸提取等，不僅大量的使用有機溶劑，破壞環(huán)境，并且耗費時間，效率低下。本文采用多相溶劑萃取技術對農吉利中的有效成分進行萃取，考察了多相溶劑萃取體系的性質并對

2、影響萃取的因素進行了探討，此外利用多相溶劑萃取技術與微波輔助萃取技術相結合，系統(tǒng)的研究了在微波作用下各種因素的影響，最后優(yōu)化了農吉利中生物堿和黃酮化合物萃取的條件，利用多相溶劑萃取體系相似相容的性質，初步使生物堿類成分和黃酮類成分得到了分離，主要研究內容與研究結果如下：
　　1、采用反相液相色譜法，分別建立了農吉利中黃酮類成分牡荊素、異牡荊素以及生物堿類成分野百合堿的HPLC色譜分析方法。以乙腈–0.5％磷酸（14：86）為流動相

3、，在波長340nm處進行檢測，牡荊素和異牡荊素色譜峰的理論板數均在10000以上。牡荊素和異牡荊素的保留時間分別為30.66 min和34.77min，在0.2080~20.08mg.L-1范圍內呈良好的線性關系，加標回收率在98%~105.5%之間。以甲醇–0.1%氨水（30：70）為流動相，在波長220nm處進行檢測，野百合堿的保留時間為11.13min，在1.092~109.2 mg.L-1范圍內呈良好的線性關系，加標回收率在97

4、.55~101.54%之間。將此方法用于微波提取農吉利中的牡荊素、異牡荊素和野百合堿的測定，方法可靠。
　　2、采用乙醇/(NH4)2SO4雙水相體系作為萃取溶劑，結合密閉微波輔助萃?。≒MAE）技術，研究了微波輔助雙水相萃取農吉利中的牡荊素和異牡荊素萃取分離性能，在單因素實驗的基礎上應用響應面分析方法優(yōu)化了實驗條件。獲得最佳萃取條件為：乙醇質量分數32%，(NH4)2SO4質量分數22%，液料比50：1，萃取時間8 min，萃取

5、溫度80℃；在此條件下牡荊素和異牡荊素的收率為243.39μg/g和162.09μg/g，與預測值242.08μg/g和164.5μg/g相接近。表明響應面分析方法的模型選擇合適，可以用來確定最佳萃取試驗條件。
　　3、選擇不同的非離子表面活性劑來構建濁點體系，研究了各體系的濁點溫度、性質和萃取性能。結果表明：Triton X-100和Tween-80都能形成穩(wěn)定的濁點體系，其中Triton X-100的濁點溫度低于Tween-8

6、0，并且萃取率較Tween-80大，其萃取最佳條件：牡荊素和異牡荊素的最佳萃取條件為Triton X-100濃度2%，平衡溫度63℃，平衡時間30min，鹽酸濃度0.05mol/L；而野百合堿的最佳萃取條件為Triton X-100濃度為2%，平衡溫度68℃，平衡時間30 min，鹽酸濃度0.1 mol/L。牡荊素、異牡荊素和野百合堿的萃取率可達77.61%、75.36%和79.6%。將微波萃取技術與濁點萃取技術結合，采用Triton

7、X-100水溶液為萃取溶劑，在密閉微波輔助下直接從農吉利藥材中提取有效成分。在單因素試驗的基礎上，采用正交試驗對影響較大的因素進行了進一步的優(yōu)化，結果表明：牡荊素和異牡荊素的萃取方案以Triton X-100濃度5%，萃取溫度90℃，液料比100：1，萃取時間10 min為最佳。野百合堿的萃取方案以Triton X-100濃度3%，萃取溫度80℃，液料比100：1，萃取時間10min為最佳。分別按最優(yōu)萃取條件進行試驗，牡荊素的收率可達6

8、01.37μg/g，異牡荊素可達386.7μg/g，野百合堿的收率可達105.48μg/g。并且在此過程中，黃酮類化合物和生物堿類化合物可以被分配到不同的相面中。
　　4、在雙水相體系的基礎上，選用合適的有機溶劑來構建三相溶劑體系，考察了乙醇/(NH4)2SO4/氯仿、石油醚、乙酸乙酯和PEG/(NH4)2SO4/氯仿、乙酸乙酯的成相性質，并對不同分子量 PEG形成三相溶劑體系的性質和萃取率進行了考察，最終選用PEG2000/(N

9、H4)2SO4/乙酸乙酯的三相溶劑體系來對農吉利中的有效成分進行提取。實驗考察了不同因素對農吉利有效成分萃取的影響，利用單因素實驗和正交試驗對該萃取過程進行優(yōu)化。最后結果為：牡荊素和異牡荊素的萃取方案以PEG質量分數為14%，(NH4)2SO4質量分數為14%，萃取溫度90℃，液料比90：1，萃取時間15 min；野百合堿的萃取方案以PEG質量分數14%，(NH4)2SO4質量分數16%，萃取溫度80℃，液料比90：1，萃取時間20 m

10、in為佳。采用不同方法對農吉利中牡荊素、異牡荊素和野百合堿進行了萃取，并以該三種有效成分的收率為目標進行對比，結果發(fā)現(xiàn)微波輔助三相萃取具有最高的萃取率；微波輔助萃取三相可以初步的分離農吉利中的黃酮類和生物堿類有效成分，并且操作簡單。
　　5、對雙水相萃取、濁點萃取和三相溶劑體系萃取農吉利中有效成分的熱力學過程進行了討論，并且對熱力學方程進行了線性擬合。結果表明，在雙水相萃取、濁點萃取和三相萃取過程中，牡荊素、異牡荊素和野百合堿的焓