肺炎老齡大鼠心肌損傷的JAK-STAT信號轉(zhuǎn)導異常與毒素清顆粒的作用.pdf

1、目的：從心肌組織細胞因子及JAK/STAT通路相關(guān)蛋白、基因表達方面，揭示肺炎克雷伯桿菌肺炎老齡大鼠心肌損傷的特點及其分子生物學機制，評價中藥復方毒素清顆粒對心肌損傷的保護作用，并進一步提示毒素清顆粒心肌損傷保護的分子生物學機制，為其臨床應用提供依據(jù)。 方法：采用氣管插管法復制肺炎模型，制備大鼠肺炎克雷伯桿菌肺炎心肌損傷模型。 1實驗一雄性SD大鼠，5-6月齡大鼠，隨機分為青年對照組和青年模型組；老齡大鼠30只，隨機分為

2、老齡對照組、老齡模型組。造模后48h取材。觀察造模前0.5h，造模后24h、48h外周WBC計數(shù)和中性粒細胞比率，動脈血LDH、CK、CK-MB和血氣分析；觀察肺、心組織普通病理改變和心肌組織的超微結(jié)構(gòu)；肺泡灌洗液做細菌培養(yǎng)作菌屬鑒定。 2實驗二老齡雄性SD大鼠，隨機分為洛美沙星組、毒素清組、RPM組、RPM+毒素清組、AG490組和AG490+毒素清組。造模前3天至取材前1天灌胃毒素清(毒素清組、AG490+毒素清組、RPM+

3、毒素清組)、RPM(RPM組、RPM+毒素清組)和洛美沙星(洛美沙星組)；造模前0.5h皮下注射AG490(AG490組、AG490+毒素清組)一次。按照動物體型系數(shù)換算等效劑量：毒素清、AG490、RPM、洛美沙星劑量分別為5.7g·kg-1·d-1、8mg·kg-1、0.4mg·kg-1·d-1、40mg·kg-1·d-1。取材與處理同實驗1。 結(jié)果：模型組及各藥物治療組大鼠支氣管肺泡灌洗液細菌培養(yǎng)后，菌屬鑒定均檢出肺炎克雷

4、伯桿菌。 1實驗一肺炎克雷伯桿菌肺炎大鼠心肌損傷模型的建立及增齡因素的影響1.1各組大鼠外周WBC計數(shù)和中性粒細胞比率的變化青年模型組和老齡模型組24h和48h的WBC計數(shù)和中性粒細胞比率均分別較青年對照組和老齡對照組明顯升高(P<0.01)。老齡模型組WBC計數(shù)和中性粒細胞比率在24h和48h升高程度均較青年模型組為低(P>0.05)。 1.2各組大鼠肺臟、心肌病理損傷和心肌酶學的變化青年模型組和老齡模型組肺臟和心肌組

5、織病理損傷以及心肌超微結(jié)構(gòu)改變明顯，肺臟、心肌含水量均有明顯升高(P<0.05，P<0.01)；LDH、CK和CK-MB均有明顯升高(P<0.01，P<0.05)。老齡模型組LDH、CK、CK-MB及心肌含水量較青年模型組顯著升高(P<0.05)。 1.3各組大鼠動脈血PaO2和PaCO2的變化模型組和老齡模型組PaO2明顯降低(P<0.01)，PaCO2明顯升高(P<0.05)；老齡模型組PaCO2較青年模型組明顯升高(P<0

6、.05)，PaO2明顯降低(P<0.05)。 2實驗二毒素清顆粒肺炎克雷伯桿菌肺炎老齡大鼠心肌損傷的保護作用及其對JAK/STAT信號轉(zhuǎn)導的影響2.1各組大鼠外周血 WBC計數(shù)和中性粒細胞比率的變化老齡模型組24h、48h WBC計數(shù)和中性粒細胞比率均較老齡對照組顯著升高(P<0.01)。藥物干預后，各組24h、48h WBC計數(shù)和中性粒細胞比率均顯著降低(P<0.05，P<0.01)，以RPM+毒素清組和AG490+毒素清組降

7、低最為顯著(P>0.05)。 2.2各組大鼠肺臟、心肌病理損傷和心肌酶學的變化各藥物治療后大鼠肺臟、心肌組織病理損傷減輕，LDH、CK、CK-MB均明顯降低(P<0.05，P<0.01)，心肺組織含水量均不同程度降低(P<0.05，P<0.01)。 2.3各組大鼠動脈血PaO2和PaCO2的變化藥物治療后，毒素清組PaO2明顯升高、PaCO2明顯降低(P<0.05)，洛美沙星組PaCO2明顯降低(P<0.05)。毒素清組

8、、AG490組及AG490+毒素清組PaCO2較洛美沙星組明顯降低(P<0.05，P<0.01)。 2.4各組大鼠心肌組織細胞因子表達的變化藥物治療后，各藥物組IL-6、TNF-α蛋白表達和/或陽性細胞數(shù)均顯著降低(P<0.01)，RPM組、RPM+毒素清組、AG490組及AG490+毒素清組IL-1蛋白表達和/或陽性細胞數(shù)均顯著降低(P<0.01)。RPM組、RPM+毒素清組、AG490組及AG490+毒素清組IL-1、TNF

9、-α蛋白表達和/或陽性細胞數(shù)均較洛美沙星組顯著降低(P<0.01)，RPM+毒素清組IL-6陽性細胞數(shù)均顯著降低(P<0.01)，毒素清組蛋白表達均顯著降低(P<0.01)。AG490+毒素清組IL-1陽性細胞數(shù)，RPM+毒素清組IL-6陽性細胞數(shù)，AG490+毒素清組TNF-α蛋白表達及陽性細胞數(shù)均顯著較毒素清組降低(P<0.01)。 2.5各組大鼠心肌組織JAK/STAT通路相關(guān)蛋白表達的變化各藥物組p-JAK2、p-STA

10、T1、p-STAT3、TAT5蛋白表達及陽性細胞數(shù)均較老齡模型組不同程度降低。與毒素清組比較，RPM+毒素清組、AG490+毒素清組p-JAK2、p-STAT3蛋白表達，STAT1表達及陽性細胞數(shù)顯著降低(P<0.01)，RPM組STAT1蛋白表達及陽性細胞數(shù)、p-STAT3蛋白表達顯著降低(P<0.01)，AG490組p-JAK2、p-STAT3蛋白表達、p-STAT1、p-STAT5陽性細胞數(shù)顯著降低(P<0.01，P<0.05)，

11、RPM組及RPM+毒素清組STAT5蛋白表達均顯著升高(P<0.01)。 2.6各組大鼠心肌組織JAK2mRNA和SOCS3mRNA表達的變化老齡模型組JAK2mRNA和SOCS3mRNA表達均顯著高于老齡對照組(P<0.01，P<0.05)；與老齡模型組比較，各藥物組JAK2mRNA表達水平均顯著降低(P<0.05，P<0.01)，SOCS3mRNA均有不同程度的升高，AG490+毒素清組升高明顯(P<0.01)。 結(jié)

12、論：①基于氣管插管法復制肺炎模型，成功制備了肺炎克雷伯桿菌肺炎大鼠心肌損傷模型，老齡大鼠心肌損傷程度較青年大鼠嚴重，這可能與增齡因素有關(guān)。②IL-1、IL-6、TNF-α等細胞因子紊亂及JAK/STAT信號轉(zhuǎn)導通路參與肺炎導致心肌損傷的發(fā)生和發(fā)展，抑制這些因子的表達和激活可以改善大鼠心肌損傷。③毒素清對老年肺炎心肌損傷具有明顯的保護作用，其主要機制可能與其參與下調(diào)細胞因子的表達，調(diào)控JAK/STAT信號通路激活和SOCS3mRNA的表達