秈稻成熟胚愈傷組織誘導(dǎo)及再生體系的優(yōu)化.pdf

1、水稻是世界上最重要的糧食作物，同時也是單子葉植物基因組學(xué)和功能組學(xué)研究的模式作物。遺傳轉(zhuǎn)化在水稻品種改良、基因功能檢測、抗逆研究中發(fā)揮越來越重要的作用，已成為開展水稻基因組學(xué)和功能組學(xué)研究的一種有效手段。
　　 水稻的遺傳轉(zhuǎn)化中最常用的方法是農(nóng)桿菌介導(dǎo)法，與其他轉(zhuǎn)化方法相比，農(nóng)桿菌是天然的轉(zhuǎn)化載體，轉(zhuǎn)化具有獨(dú)特的優(yōu)勢。但是，由于水稻品種間遺傳特異性及基因依賴性差別，導(dǎo)致了水稻遺傳轉(zhuǎn)化的復(fù)雜性。秈稻和粳稻是栽培稻的兩個主要亞種，它

2、們的組織培養(yǎng)特性差異大，秈稻較粳稻的再生頻率低，轉(zhuǎn)基因植株的獲得需要通過大量的重復(fù)實(shí)驗。目前還沒有適用于所有秈稻品種的高效遺傳轉(zhuǎn)化體系。但秈稻是我國的主要栽培稻，遺傳轉(zhuǎn)化技術(shù)的成熟對秈稻進(jìn)行改良具有重要意義。
　　 紅蓮型細(xì)胞質(zhì)雄性不育(HL-CMS)水稻是生產(chǎn)上應(yīng)用的三大主要的細(xì)胞質(zhì)雄性不育栽培稻 (Oryza sativa L)類型之一。本研究結(jié)合本實(shí)驗室在水稻遺傳轉(zhuǎn)化方面的工作，探討以HL-CMS秈稻不育系粵泰A與保持系粵

3、泰B成熟胚為材料的愈傷組織誘導(dǎo)及再生體系優(yōu)化。主要的研究結(jié)果如下。
　　 1、分析了影響秈稻品種YTA與YTB成熟胚愈傷組織誘導(dǎo)及繼代的主要因素。發(fā)現(xiàn)較大高低溫差處理有利于水稻種子的去休眠和提高水稻愈傷組織的誘導(dǎo)率。種子的消毒滅菌只采用濃度為1.5％次氯酸鈉溶液，較其它方法更能提高愈傷組織的誘導(dǎo)率。2，4-D的濃度在3mg·L-1左右誘導(dǎo)率高，在此條件下，添加一定濃度的6-BA對誘導(dǎo)效果影響不大。培養(yǎng)基中添加100-500mg·

4、L-1的硫代硫酸鈉及30mg·L-1腐胺等小分子有機(jī)物能改善愈傷組織的質(zhì)量，降低褐化率。不同培養(yǎng)基對YTA和YTB的愈傷誘導(dǎo)率及繼代生長狀況有很大的影響，N6、NB、MS三種培養(yǎng)基均可用于YTA和YTB愈傷組織的誘導(dǎo)和繼代，誘導(dǎo)16天后，再繼代6天，愈傷組織的胚性狀態(tài)最好。
　　 2、分析了影響農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化及分化成苗的主要因素。發(fā)現(xiàn)抗性愈傷率與抗性愈傷組織質(zhì)量是一對矛盾。一定的真空負(fù)壓處理及適當(dāng)?shù)母稍锾幚砟軌蛱岣咿D(zhuǎn)化率。V型篩選可