人參皂苷Rb1對(duì)慢性缺血損傷大鼠腦組織中自噬表達(dá)的影響.pdf

1、目的:探討人參皂苷Rb1對(duì)自噬調(diào)節(jié)的作用，以期能尋找一種減輕腦缺血缺氧后腦組織損傷的中藥，進(jìn)而減輕腦缺血缺氧對(duì)機(jī)體帶來(lái)的影響。
　　方法:將30只SD大鼠隨機(jī)分成6組，每組5只，分別為高劑量組、中劑量組、低劑量組、空白對(duì)照組、假手術(shù)組、未做處理組，通過(guò)永久性結(jié)扎雙側(cè)頸總動(dòng)脈模擬腦缺血缺氧模型，分別按照10mg/kg、5mg/kg、2.5mg/kg的濃度在造模后1-28天對(duì)高劑量組、中劑量組、低劑量組進(jìn)行腹腔注射，每天一次，并對(duì)假手

2、術(shù)組和空白對(duì)照組每天給予超純水0.5ml，未做處理組不進(jìn)行腹腔注射作為對(duì)照。同時(shí)1、分別在造模前、造模45天后、造模90天后對(duì)各組大鼠進(jìn)行為期10天的水迷宮實(shí)驗(yàn)(具體包括定位航行實(shí)驗(yàn)、工作記憶實(shí)驗(yàn))以通過(guò)觀察各組大鼠尋找平臺(tái)的功能來(lái)評(píng)估大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力進(jìn)而評(píng)價(jià)其認(rèn)知功能。2、在最后一次水迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)束后對(duì)大鼠斷頭取腦，收集其額葉及海馬組織，①Western blot檢測(cè)大鼠腦組織里Caspase-3、LC3B的含量，從而了解大鼠腦組織的

3、自噬水平。②將腦組織HE染色后在光學(xué)顯微鏡下觀察(1)腦:有沒有變性、壞死的皮質(zhì)神經(jīng)元，有沒有增生的膠質(zhì)細(xì)胞，髓質(zhì)有沒有出現(xiàn)水腫。(2)海馬:海馬各區(qū)域的椎體細(xì)胞有沒有變性及壞死等改變。同時(shí)對(duì)腦組織出現(xiàn)的各種以上改變進(jìn)行程度輕重的評(píng)分。
　　結(jié)果:①與正常對(duì)照組、假手術(shù)組初次水迷宮后即獲得學(xué)習(xí)記憶能力，在第45天及90天后尋找平臺(tái)時(shí)間明顯縮短相比，模型組大鼠出現(xiàn)明顯認(rèn)知功能障礙，具體表現(xiàn)為不管是工作記憶還是定位航行，模型組大鼠尋找

4、平臺(tái)的持續(xù)時(shí)間及潛伏期均延長(zhǎng)(P＜0.05)，上臺(tái)前搜索距離明顯延長(zhǎng)(P＜0.001)，這一表現(xiàn)在造模90天后表現(xiàn)更顯著。而人參皂苷Rb1可降低腦缺血缺氧大鼠尋找平臺(tái)的持續(xù)時(shí)間及潛伏期(P＜0.05)，同時(shí)明顯縮短模型大鼠上臺(tái)前的搜索距離(P＜0.001)，濃度越高效果越明顯。②所有腦缺血缺氧模型組的Caspase-3含量增高(P＜0.05)，LC3B含量降低(P＜0.05)，人參皂苷Rb1作用于模型鼠后可抑制Caspase-3的表達(dá)同

5、時(shí)促進(jìn)LC3B的表達(dá)，且濃度越高效果越明顯。③HE染色后觀察模型組大鼠腦組織后可見:腦組織結(jié)構(gòu)與未做處理組相比，大多數(shù)區(qū)域皮層結(jié)構(gòu)消失，神經(jīng)元壞死，局部組織因高度疏松而表現(xiàn)為網(wǎng)狀，可以看到血管及膠質(zhì)細(xì)胞增殖;1區(qū)及2區(qū)海馬結(jié)構(gòu)不清楚，大多數(shù)錐體細(xì)胞壞死、消失，殘留的個(gè)別壞死細(xì)胞結(jié)構(gòu)不明;3區(qū)大多錐體細(xì)胞形狀不規(guī)則、核固縮、體積變性;病灶改變程度評(píng)分顯示模型組大鼠腦組織出現(xiàn)極重度改變;高劑量組、中劑量組腦組織為輕度改變，低劑量組腦組織為中