捻轉(zhuǎn)血矛線蟲Hc--daf--12基因結(jié)構(gòu)和功能的研究.pdf

1、捻轉(zhuǎn)血矛線蟲（Haemonchus contortus）是廣泛寄生于牛羊等反芻動(dòng)物真胃的常見寄生性線蟲，因成蟲吸食宿主血液而引起動(dòng)物尤其是羔羊的貧血、衰弱、生長遲緩甚至死亡，給畜牧業(yè)造成了重大的經(jīng)濟(jì)損失。目前，捻轉(zhuǎn)血矛線蟲的防治主要是靠化學(xué)藥物驅(qū)蟲。然而，化學(xué)藥物的濫用不僅導(dǎo)致抗藥蟲株的出現(xiàn)，并且由于藥物殘留也給環(huán)境造成不同程度的污染。因此，尋找一種有效且對(duì)環(huán)境無害的防治捻轉(zhuǎn)血矛線蟲新方法是十分必要的。研究發(fā)現(xiàn)，寄生線蟲的自由生活階段與

2、自由生活的秀麗隱桿線蟲的dauer（滯育）階段無論在形態(tài)、發(fā)育和行為方面都極為相似。秀麗隱桿線蟲的dauer階段是由四個(gè)信號(hào)通路進(jìn)行調(diào)控的，其中核受體信號(hào)通路在最下游進(jìn)行調(diào)控，DAF-12是該信號(hào)通路極其關(guān)鍵的基因，且調(diào)控蟲體的生長發(fā)育。本課題通過生物信息學(xué)分析、免疫組化及RNA干擾等技術(shù)對(duì)捻轉(zhuǎn)血矛線蟲Hc-daf-12基因結(jié)構(gòu)和功能進(jìn)行了研究。
　　本實(shí)驗(yàn)首先確定了捻轉(zhuǎn)血矛線蟲Hc-daf-12基因的cDNA、gDNA、氨基酸及

3、上游啟動(dòng)子序列。并且發(fā)現(xiàn)Hc-daf-12與daf-12家族基因高度同源，且具有共同保守的結(jié)構(gòu)域Ligand Binding Domain和DNA Binding Domain。經(jīng)過生物信息學(xué)分析發(fā)現(xiàn)Hc-daf-12在捻轉(zhuǎn)血矛線蟲中的各個(gè)階段都可以轉(zhuǎn)錄且在L3期轉(zhuǎn)錄水平最高。通過原核表達(dá)Hc-daf-12的截短蛋白Hc-DAF-12-LBD，并用純化到的高特異性的蛋白免疫兔子獲得多克隆抗體，用多抗定位到該基因在捻轉(zhuǎn)血矛線蟲腸道表達(dá)。最