蜂王漿蛋白質(zhì)、多肽生物活性及儲(chǔ)藏過(guò)程中品質(zhì)變化研究.pdf

1、蜂王漿作為一種珍貴的保健食品已經(jīng)有干百年的歷史了,其對(duì)人體的各種生物活性與含有的功能性成分是近年來(lái)的研究熱點(diǎn)。本研究檢測(cè)了蜂王漿的物理、化學(xué)特性、儲(chǔ)藏穩(wěn)定性和抗氧化活性,初步研究了它對(duì)脂肪酶和α-葡萄糖苷酶的抑制活性,優(yōu)化了蜂王漿蛋白質(zhì)酶解法制備活性多肽的條件并對(duì)活性組分進(jìn)行純化以提高活性。
　　 本論文采用杭州保靈養(yǎng)泰禾提供的蜂王漿,在4℃、25℃、37℃下各保存30天,發(fā)現(xiàn)樣品的水溶性蛋白質(zhì)含量、氨基酸含量、多肽含量、水分含

2、量等逐漸下降,而水解度、脂肪氧化程度、酸度逐漸提高,酸敗程度逐漸增加,顏色變暗;通過(guò)對(duì)脂類物質(zhì)的GC-MC分析,檢測(cè)出24種脂類成分;通過(guò)SDS-PAGE電泳分析,發(fā)現(xiàn)儲(chǔ)藏溫度越高,蜂王漿水溶性蛋白質(zhì)降解就越明顯。這些理化指標(biāo)隨溫度和時(shí)間的變化較敏感,可作為品質(zhì)評(píng)價(jià)的參考,也說(shuō)明了蜂王漿儲(chǔ)藏穩(wěn)定性較差,可能是引起活性變化的原因。
　　 通過(guò)對(duì)蜂王漿生物活性的分析,發(fā)現(xiàn)蜂王漿蛋白質(zhì)提取液有較高的抗氧化活性,并首次發(fā)現(xiàn)蜂王漿具有較高

3、的脂肪酶抑制活性和α-葡萄糖苷酶抑制活性。蜂王漿蛋白質(zhì)對(duì)DPPH自由基的清除率最高能達(dá)到60％以上;對(duì)鄰苯三酚自氧化的抑制率最高能達(dá)到91.89％;對(duì)脂質(zhì)體過(guò)氧化的抑制率最高能達(dá)到60.10％;其抗氧化活性隨著儲(chǔ)藏時(shí)間逐漸下降,儲(chǔ)藏溫度越高,活性下降越快。蜂王漿蛋白質(zhì)對(duì)脂肪酶的抑制率最高能達(dá)到76.59％,對(duì)脂肪酶的抑制常數(shù)ki為5.53×10-2mg/mL,抑制類型為競(jìng)爭(zhēng)性抑制,抑制活性隨著儲(chǔ)藏溫度和儲(chǔ)藏時(shí)間的增加而下降:對(duì)α-葡萄糖

4、苷酶的抑制活性最高達(dá)到66.23％,抑制常數(shù)ki為11.74 mg/mL,抑制類型為混合競(jìng)爭(zhēng)性抑制。
　　 本實(shí)驗(yàn)用單因素試驗(yàn)和Box-Bohnken中心組合設(shè)計(jì)試驗(yàn),優(yōu)化了蜂王漿蛋白質(zhì)酶解制備活性多肽的工藝參數(shù),選擇胃蛋白酶為作用酶,蛋白質(zhì)提取料液比1:50,酶解時(shí)間5.7 h,初始pH2.3,酶用量21mg/mL,酶解溫度35℃,在此條件下,多肽濃度達(dá)到1.65 mg/mL,且抗氧化活性、對(duì)脂肪酶的抑制活性和對(duì)α-葡萄糖苷酶

5、的抑制活性都明顯提高,說(shuō)明酶解處理提高了蜂王漿的利用價(jià)值。
　　 蜂王漿蛋白質(zhì)在三種酶解方式作用下的產(chǎn)物:PPs(胃蛋白酶酶解)、TPs(胰蛋白酶酶解)、PTPs(胃蛋白酶和胰蛋白酶復(fù)合酶解)。其中對(duì)DPPH自由基的清除活性最強(qiáng)的是PTPs,樣品的水解度最高,氨基酸產(chǎn)率也最高;而對(duì)于超氧陰離子的清除活性及對(duì)脂肪酶、α-葡萄糖苷酶的抑制活性來(lái)說(shuō)最強(qiáng)的是PPs,樣品的多肽含量最高;從各分子量范圍的酶解產(chǎn)物來(lái)看,PPs中小于650 D