Hmox1調(diào)控BMP9誘導(dǎo)的間充質(zhì)干細(xì)胞C3H10T1-2成骨及成脂分化.pdf

1、目的：
　　研究血紅素加氧酶1（Heme oxygenase1,Hmox1）對(duì)骨形態(tài)發(fā)生蛋白9（Bone Morphogenetic Protein9,BMP9）誘導(dǎo)的間充質(zhì)干細(xì)胞（Mesenchymal Stem Cells,MSCs）C3H10T1/2向成骨及成脂雙向分化的影響及可能機(jī)制。
　　方法：
　　腺病毒Ad-BMP9感染C3H10T1/2，熒光定量PCR（qPCR）檢測(cè) Hmox家族中 Hmox1的基因表

2、達(dá)變化，再用Western Blot檢測(cè)HMOX1蛋白表達(dá)。用Hmox1的激動(dòng)劑COPP和抑制劑ZNPP分別同BMP9共同處理 C3H10T1/2，堿性磷酸酶（ALP）染色以及定量分析和茜素紅S染色檢測(cè)Hmox1對(duì)BMP9誘導(dǎo)的C3H10T1/2成骨分化的影響，油紅O染色檢測(cè)Hmox1對(duì)BMP9誘導(dǎo)的C3H10T1/2成脂分化的影響。構(gòu)建過表達(dá)Hmox1的腺病毒（Ad-Hmox1），qPCR和Western Blot驗(yàn)證Ad-Hmox1

3、的有效性。Ad-Hmox1與BMP9處理C3H10T1/2，ALP染色和定量分析檢測(cè)成骨早期指標(biāo)，qPCR檢測(cè)相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子Runx2、Dlx5、Id1、Id2和Id3基因表達(dá)情況，Western Blot檢測(cè)RUNX2和DLX5蛋白表達(dá)情況；茜素紅S染色檢測(cè)鈣鹽沉積，qPCR檢測(cè)骨鈣素(Osteocalcin,Ocn)表達(dá)，Western Blot檢測(cè)骨橋素（Osteopotin,OPN）以及OCN蛋白表達(dá)；油紅O染色檢測(cè)脂滴形成，qP

4、CR檢測(cè)成脂分化相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子C/EBPα、C/EBPβ、PPARγ2表達(dá)情況，Western Blot檢測(cè)PPAR，C/EBP蛋白水平； Western Blot檢測(cè)Hmox1對(duì)Smad1/5/8，MAPKs，PI3K/AKT以及Wnt/β-catenin信號(hào)的影響；細(xì)胞免疫熒光檢測(cè)β-catenin的細(xì)胞核內(nèi)聚集情況。
　　結(jié)果：
　　BMP9可促進(jìn) C3H10T1/2細(xì)胞中內(nèi)源性 Hmox1表達(dá)；COPP可增強(qiáng)BMP9誘

5、導(dǎo)下C3H10T1/2的ALP和鈣鹽沉積并且抑制脂滴形成，ZNPP可減少BMP9誘導(dǎo)下C3H10T1/2的ALP和鈣鹽沉積并且促進(jìn)脂滴形成；構(gòu)建的Ad-Hmox1可成功表達(dá)，其與BMP9共同作用下使成骨指標(biāo)ALP、鈣鹽沉積以及成骨相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子Dlx5、Runx2、Id2表達(dá)增加；反之，使脂滴形成及成脂相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子C/EBPα表達(dá)減少；Hmox1對(duì) Smad1/5/8的磷酸化無影響，但可進(jìn)一步增強(qiáng)BMP9誘導(dǎo)的p38磷酸化，減低ERK1/