辣木葉黃酮的提取、分離純化、結(jié)構(gòu)鑒定及其生物活性研究.pdf

1、辣木為辣木科辣木屬熱帶多年生落葉喬木，原產(chǎn)于印度西北部的喜馬拉雅山南麓，不僅可食用而且具有巨大的藥用價(jià)值，被稱(chēng)為“神奇之樹(shù)”。近年來(lái)，辣木在我國(guó)廣東、廣西、云南等西南省份得到廣泛種植。辣木葉于2012年被我國(guó)衛(wèi)生部門(mén)公布為新資源食品，黃酮類(lèi)化合物是其重要的功能性成分之一。辣木葉黃酮（flavonoids fromMoringa oleifera Lam.leaves，F(xiàn)ML）具有抗氧化、抑菌、降血糖、抗癌等多種生理活性，可以開(kāi)發(fā)成保健食

2、品、臨床藥物、天然防腐劑等，應(yīng)用前景廣闊。本論文以FML為研究對(duì)象，優(yōu)化了其提取、分離純化工藝，初步分析了其結(jié)構(gòu)，并對(duì)其抗氧化、抑菌、抑制胰脂肪酶和α-葡萄糖苷酶的生物活性進(jìn)行了研究。
　　本論文主要研究?jī)?nèi)容及結(jié)論如下:
　　1.利用響應(yīng)面分析法對(duì)微波輔助提取FML的工藝進(jìn)行優(yōu)化。以乙醇濃度、料液比、提取時(shí)間和提取功率為影響因素，以黃酮提取率為響應(yīng)值，在單因素實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，根據(jù)Box-Behnken原理設(shè)計(jì)了一組4因素3水平

3、實(shí)驗(yàn)。對(duì)29組實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行擬合及統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，得出最佳的提取條件為:提取時(shí)間308 s，提取功率302 W，乙醇濃度75％，料液比1∶52 g/mL，在此優(yōu)化條件下，黃酮的提取率為5.53％，和模型預(yù)測(cè)值5.69％十分接近。
　　2.采用大孔樹(shù)脂色譜柱和聚酰胺色譜柱聯(lián)用的工藝對(duì)FML進(jìn)行分離純化。從6種極性不同的大孔樹(shù)脂中篩選出AB-8型適合用于FML的分離純化，并研究了其靜態(tài)吸附動(dòng)力及熱力學(xué)特征。對(duì)色譜柱的分離純化工藝進(jìn)行了優(yōu)化，

4、得到AB-8型大孔色譜柱的最優(yōu)條件為:上樣濃度為7 mg/mL，上樣流速為2 BV/h，上樣體積為1 BV，洗脫液為70％乙醇溶液，洗脫液流速為2 BV/h，洗脫液體積為2.5 BV;聚酰胺色譜柱的最優(yōu)條件為:上樣濃度為4 mg/mL，上樣流速為1.5BV/h，上樣體積為1 BV，洗脫液濃度為70％，洗脫液流速為1.5 BV/h，洗脫液體積為3 BV。純化后FML浸膏中黃酮的含量由13.38％提高到76.45％，并用HPLC測(cè)定了純化前

5、后FML中蘆丁的含量，驗(yàn)證了分離純化的效果。
　　3.用UPLC-Q-Orbitrap MS液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)對(duì)純化后的FML結(jié)構(gòu)進(jìn)行定性分析和鑒定。根據(jù)色譜和質(zhì)譜信息，參考相關(guān)文獻(xiàn)，分析鑒定出11個(gè)黃酮類(lèi)化合物和2個(gè)酚酸類(lèi)化合物，分別為:薔薇苷、蘆丁、牡荊素、槲皮素-3-O-葡萄糖苷、槲皮素-3-O-（6-丙二?；咸烟擒眨㈤纹に?3-O-羥甲基戊二?；肴樘擒铡愂罄钏?3-O-蕓香糖苷、槲皮素-3-O-乙?；咸烟擒?、山奈酚-3

6、-O-丙二?；禾擒?、山奈酚-3-O-羥甲基戊二?；禾擒?、山奈酚-3-O-葡萄糖苷，3-咖啡酰奎寧酸和4-咖啡?？鼘幩?。
　　4.通過(guò)測(cè)定純化前后的FML對(duì)DPPH自由、羥基自由的基清除能力及還原能力來(lái)評(píng)價(jià)其抗氧化能力，通過(guò)測(cè)定抑菌圈直徑和最小抑菌濃度(MIC)來(lái)研究其抑菌活性。未純化、純化的FML對(duì)DPPH的半數(shù)清除濃度(EC50)分別為:0.03 mg/mL、0.438 mg/mL，對(duì)羥基自由基的EC50分別為:0.054

7、mg/mL、0.874 mg/mL，0.075 mg/mL純化的FML與0.048 mg/mL VC具有相當(dāng)?shù)倪€原能力。未純化的FML對(duì)大腸桿菌、枯草芽孢桿菌、藤黃微球菌有抑制作用，20 mg/mL時(shí)的最大抑菌圈直徑分別為16.71、10.66、15.77 mm，MIC分別為10、5、10 mg/mL，對(duì)金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌無(wú)抑制。純化后的FML對(duì)大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、藤黃微球菌具有較好的抑制作用，20 mg/

8、mL時(shí)最大抑菌圈直徑分別為21.59、17.80、20.91、23.94 mm, MIC分別為1.250、2.500、0.625、1.250 mg/mL,對(duì)銅綠假單胞菌無(wú)抑制作用。純化后FML的抗氧能力和抑菌活性好于純化前。
　　5.用PNPP和PNPG法，分別測(cè)定FML對(duì)胰脂肪酶和α-葡萄糖苷酶的抑制作用，并通過(guò)Lineweaver-Burk雙倒數(shù)作圖法判斷它們的抑制作用類(lèi)型。結(jié)果表明純化后的FML對(duì)胰脂肪酶具有較好的抑制作用，