Omi在離心運(yùn)動(dòng)誘導(dǎo)骨骼肌細(xì)胞凋亡及針刺干預(yù)中的作用.pdf

1、目的：
　　觀察離心運(yùn)動(dòng)對骨骼肌細(xì)胞凋亡和線粒體的影響，分析絲氨酸蛋白酶（Omi）在離心運(yùn)動(dòng)后骨骼肌細(xì)胞凋亡中的作用機(jī)制，探究針刺干預(yù)對骨骼肌細(xì)胞凋亡的作用。
　　方法：
　　研究一和研究二將大鼠分為安靜對照、離心運(yùn)動(dòng)、單純針刺和運(yùn)動(dòng)針刺四大組，研究三將大鼠分為安靜對照、離心運(yùn)動(dòng)、單純阻斷、DMSO和運(yùn)動(dòng)阻斷五大組。使用熒光酶聯(lián)免疫吸附法檢測半胱氨酸天冬氨酸特異性蛋白酶（Caspase-3，-8，-9，-12）的活性；

2、透射電鏡觀察線粒體超微結(jié)構(gòu)；熒光染色檢測線粒體膜通透性轉(zhuǎn)換孔（MPTP）的開放情況；Western Blot和Realtime-PCR法分別檢測Omi、凋亡抑制蛋白（XIAP）的蛋白表達(dá)和基因水平；Co-IP法檢測XIAP和Omi的相互結(jié)合作用。
　　結(jié)果：
　?。?）離心運(yùn)動(dòng)后Caspase-3，-8，-9，-12活性均一過性升高，而針刺能顯著降低運(yùn)動(dòng)后Caspase-3，-8，-9，-12活性。離心運(yùn)動(dòng)后線粒體分布和形態(tài)

3、出現(xiàn)典型的病理學(xué)改變，而針刺能促進(jìn)其恢復(fù)。離心運(yùn)動(dòng)能使MPTP開放增加，而針刺能減小運(yùn)動(dòng)后MPTP開放程度。
　　（2）離心運(yùn)動(dòng)后Omi、XIAP的蛋白表達(dá)和mRNA水平均呈一過性升高，針刺能明顯下調(diào)運(yùn)動(dòng)后Omi的表達(dá)，上調(diào)運(yùn)動(dòng)后XIAP的表達(dá)。離心運(yùn)動(dòng)和針刺干預(yù)均能促進(jìn)XIAP和Omi相互結(jié)合。
　?。?）Omi的特異性抑制劑 Ucf-101能明顯降低運(yùn)動(dòng)后Caspase-3，-9活性，對運(yùn)動(dòng)后Caspase-8，-12活

4、性沒有影響。Ucf-101能下調(diào)運(yùn)動(dòng)后Omi的蛋白表達(dá)，上調(diào)運(yùn)動(dòng)后XIAP的蛋白表達(dá)。
　　結(jié)論：
　?。?）離心運(yùn)動(dòng)可以引起骨骼肌細(xì)胞凋亡，這種凋亡可能有Caspase-8、Caspase-9和Caspase-12依賴的凋亡途徑同時(shí)參與。而針刺干預(yù)能通過抑制這三條途徑來減少細(xì)胞凋亡的發(fā)生。離心運(yùn)動(dòng)可以導(dǎo)致骨骼肌線粒體結(jié)構(gòu)損傷，MPTP高通透性開放，而針刺能促進(jìn)其恢復(fù)。
　?。?）離心運(yùn)動(dòng)可能通過上調(diào)Omi的表達(dá)，促進(jìn)