bFGF-PLGA緩釋微球?qū)Υ笫蠹顾钃p傷后神經(jīng)保護(hù)作用的初步研究.pdf

1、目的：從細(xì)胞凋亡與神經(jīng)再生兩方面探討bFGF—PLGA緩釋微球?qū)Υ笫蠹顾杓毙該p傷后神經(jīng)保護(hù)作用的可能機(jī)制。 方法：1．首先采用復(fù)乳包囊法制作bFGF—PIGA緩釋微球，用掃描電鏡進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察，進(jìn)一步測定PLGA微球的載藥量與包封率及體外釋藥特點，將制備的bFGF—PLGA緩釋微球冷凍離心、干燥后保存?zhèn)溆谩?.24，只雌性SD大鼠，隨機(jī)分為假損傷組與模型組各12只，用馮大雄等改良Allen’法建立脊髓損傷模型，打擊勢能為50ge

2、m，觀察損傷后形態(tài)學(xué)變化、測定體感誘發(fā)電位(SEP)、采用BBB法對后肢運動功能進(jìn)行評分；采用蛛網(wǎng)膜下腔置管給藥的方法經(jīng)PElO導(dǎo)管，用微量給樣器注入生理鹽水，觀察術(shù)后導(dǎo)管是否脫落。3．72只雌性SD大鼠，隨機(jī)分為鹽水組、bFGF組及bFGF—PIGA緩釋微球組各24只；按第一部分造模方法造模后，bFGF組于脊髓損傷術(shù)后即刻，0.5，1，2,3,4,6，12,24，及48hr經(jīng)導(dǎo)管注入bFGF20μl，術(shù)后第7天再次經(jīng)導(dǎo)管注入bFGF溶

3、液20μl，以后每周經(jīng)導(dǎo)管注入bfgf20μl；生理鹽水組脊髓損傷后經(jīng)蛛網(wǎng)膜下腔導(dǎo)管于同時間注入等量生理鹽水；bFGF—PLGA緩釋微球組(根據(jù)所測定的bFGF的載藥量以及bFGF組的用量計算)一次性給予bFGF—PIGA緩釋微球。然后每組于SCI后6h，ld，3d，7d，14d，21d每個時相點各處死4只，行TUNEL標(biāo)記法、透射電鏡觀察細(xì)胞凋亡情況；用免疫組化方法觀察凋亡調(diào)控基因產(chǎn)物BCL-2及Bax的表達(dá)，并用半定量方法進(jìn)行分析，

4、結(jié)果用方差分析處理。4．雌性SD大鼠36只，隨機(jī)分為鹽水組、bFGF組與bFGF—PLGA緩釋微球組各12只；按第二部分方法造模與給藥，于SCI后l一6周，每周行BBB運動功能評分，每組于SCI后2、4、6周三個時間點各處死4只大鼠，經(jīng)免疫組化方法觀察GAP-43、NF200、GFAP的表達(dá)，并行半定量分析，結(jié)果用方差分析處理。 結(jié)果：1．微球表面光滑圓整，球體均勻度好，其包封率和載藥量分別為64.25±1.14和31.18±0

5、.48,體外釋藥特性好。2．SCI后大鼠損傷段脊髓出現(xiàn)出血、壞死及炎性細(xì)胞浸潤表現(xiàn)；SEP呈一直線改變，蛛網(wǎng)膜下腔所置PEl0導(dǎo)管未見脫落。3．SCI后通過透射電鏡可以觀察到典型的神經(jīng)細(xì)胞凋亡與壞死表現(xiàn)；TUNEL結(jié)果顯示細(xì)胞凋亡指數(shù)下降；免疫組化觀察到Bcl-2表達(dá)與Bax表達(dá)均于3天后達(dá)高峰，但前者表達(dá)增高，后者減少，且微球組好于bFGF組，差別均有顯著性(P<0.05)。4．免疫組化結(jié)果顯示bFGF組及微球組GAP—43、NF20

6、0、GFAP在不同時間點陽性表達(dá)面積均高于鹽水組，而微球組又高于bFGF組，差別有顯著性(P<0.05)。從第2周開始bFGF組及微球組BBB評分高于鹽水對照組，且微球組好于bFGF組，差別有顯著性(P<0.05)。 結(jié)論：1．通過本實驗我們驗證了馮大雄等改良Allen’脊髓損傷模型的可行性，符合本實驗研究SCI的需要。2．SCI后應(yīng)用bFGF干預(yù)可以促進(jìn)Bcl-2基因的表達(dá)，抑制：Bax基因的表達(dá)，從而抑制細(xì)胞的凋亡，這可能是