西格列汀對ApoE---小鼠動(dòng)脈粥樣硬化病變影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:
　　 研究DPP-4抑制劑—西格列汀對載脂蛋白E基因敲除(ApoE-/-)小鼠動(dòng)脈粥樣硬化(AS)模型中主動(dòng)脈血管細(xì)胞黏附分子-1(VCAM-1)和細(xì)胞間黏附分子-1(ICAM-1)蛋白的表達(dá)和血清基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1α（SDF-1α）水平的影響，探討西格列汀抗AS的直接作用及部分可能機(jī)制。
　　 方法:
　　 1.動(dòng)脈粥樣硬化模型的建立
　　 (1)61只ApoE-/-小鼠SPF級(jí)飼養(yǎng)，適應(yīng)性喂

2、養(yǎng)一周后，按體重大小隨機(jī)分為兩組:普食組(n=13)和模型組(n=48)。普食組小鼠給予基礎(chǔ)飼料喂養(yǎng)至實(shí)驗(yàn)結(jié)束。模型組小鼠給予高脂飼料喂養(yǎng)12周誘導(dǎo)AS產(chǎn)生。
　　 (2)喂養(yǎng)12周后，普食組和模型組分別隨機(jī)抽取6只小鼠，取其主動(dòng)脈弓，行HE染色，檢測AS造模情況。當(dāng)模型組HE染色檢測到AS斑塊形成時(shí)，證明造模成功。
　　 2.分組及藥物干預(yù)
　　 (1)分組:AS模型建立后，將模型組小鼠按體重大小隨機(jī)分為6組(

3、每組n=7):高脂組、阿托伐他汀組（阿組）、西格列汀小劑量組（西小組）、西格列汀大劑量組（西大組）、阿托伐他汀聯(lián)合西格列汀小劑量組（阿+西小組）、阿托伐他汀聯(lián)合西格列汀大劑量組（阿+西大組），以上各組繼續(xù)給予高脂飼料喂養(yǎng)。普食組(n=7)繼續(xù)給予基礎(chǔ)飼料喂養(yǎng)。
　　 (2)藥物干預(yù):普食組和高脂組不予藥物干預(yù);阿組:阿托伐他汀鈣片10mg/kg/d;西小組:西格列汀50mg/kg/d;西大組:西格列汀200mg/kg/d;阿+西

4、小組:阿托伐他汀鈣片10mg/kg/d，西格列汀50mg/kg/d;阿+西大組:阿托伐他汀鈣片10mg/kg/d，西格列汀200mg/kg/d。給藥方式:飲水給藥。藥物干預(yù)時(shí)間:6周。
　　 3.檢測指標(biāo)及檢測方法(1)體重、血糖:每周監(jiān)測小鼠體重，檢測隨機(jī)血糖。
　　 (2)血脂、血清胰島素、血清SDF-1α水平:藥物干預(yù)后，各組小鼠禁食12小時(shí)后，框周靜脈叢取血，檢測血脂、血清胰島素、血清SDF-1α水平。血脂:甘油

5、三酯(TG)和總膽固醇(TC)采用酶法檢測，血清低密度脂蛋白(LDL-C)采用選擇性沉淀法檢測。血清胰島素、SDF-1α水平采用酶聯(lián)免疫法（ELISA法）。
　　 (3)主動(dòng)脈弓HE病理組織學(xué)染色:藥物干預(yù)后，各組小鼠取其主動(dòng)脈弓行HE染色(n=3)，檢測藥物對主動(dòng)脈血管內(nèi)膜和AS斑塊的影響。
　　 (4)Westernblot法檢測主動(dòng)脈ICAM-1和VCAM-1蛋白的表達(dá):藥物干預(yù)6周后，每組小鼠取胸主動(dòng)脈(n=3)

6、，Westernblot法檢測ICAM-1、VCAM-1蛋白的表達(dá)。
　　 結(jié)果:
　　 1.藥物干預(yù)后，主動(dòng)脈弓HE染色顯示:藥物干預(yù)各組與高脂組比較，HE染色差異不顯著，均可見內(nèi)膜增厚、不完整，斑塊形成，部分斑塊內(nèi)可見膽固醇結(jié)晶。
　　 2.藥物干預(yù)后，藥物干預(yù)各組與高脂組體重?zé)o統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p=0.708)。
　　 3.藥物干預(yù)后，各組小鼠血糖、血清胰島素水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p=0.421，p=0.

7、345)。
　　 4.血脂:LDL-C:藥物干預(yù)各組低于高脂組，其中西小組、西大組、阿+西小組與高脂組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p=0.02;p=0.002;p=0.01)。西小/大組、阿+西小/大組低于阿組，其中西大組、阿+西小組與阿組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p=0.011;p=0.044)。TG、TC:藥物干預(yù)組與高脂組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＞0.05)。
　　 5.Westernblot結(jié)果:
　　 VCAM-1:

8、阿+西小組此蛋白表達(dá)最少，與普食組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p=0.57)。西小組、阿+西小組比高脂組/阿組表達(dá)顯著減少(p＜0.01)。西小組顯著低于西大組(p＜0.01);阿+西小組顯著低于阿+西大組(p＜0.01)。
　　 ICAM-1:阿+西小組表達(dá)最少，低于普食組(p=0.014)。藥物干預(yù)各組顯著低于高脂組(p＜0.01)。西小組、阿+西小組比阿組表達(dá)減少，其中西小組與阿組無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p=0.144)，阿+西小組顯著低于阿

9、組(p＜0.01)。西小組低于西大組(p=0.037);阿+西小組顯著低于阿+西大組(p＜0.01)。
　　 6.血清SDF-1α水平:各組之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p=0.894)。
　　 結(jié)論:
　　 1.西格列汀對ApoE-/-小鼠動(dòng)脈粥樣硬化病變的影響與其體重、血糖、血清胰島素水平無關(guān)。
　　 2.西格列汀下調(diào)ApoE-/-動(dòng)脈粥樣硬化模型小鼠LDL-C水平，降低心血管疾病的危險(xiǎn)因素。
　　

10、3.小劑量西格列汀能顯著下調(diào)該模型小鼠主動(dòng)脈中黏附分子VCAM-1、ICAM-1蛋白的表達(dá)，且與阿托伐他汀聯(lián)合后此作用更明顯。
　　 4.大劑量西格列汀/聯(lián)合阿托伐他汀干預(yù)分別與小劑量西格列汀/聯(lián)合阿托伐他汀比較，上調(diào)主動(dòng)脈黏附分子VCAM-1、ICAM-1蛋白的表達(dá)。
　　 5.與高脂組比較，西格列汀不同劑量干預(yù)后，血清SDF-1α水平有增加趨勢，阿托伐他汀干預(yù)后，SDF-1α水平有降低趨勢;與西格列汀不同劑量單藥物干