翻譯控制腫瘤蛋白(TCTP)在早孕小鼠子宮內(nèi)膜圍著床期的表達(dá)及意義.pdf

1、目的：翻譯控制腫瘤蛋白(The translationally controlled tumor protein,TCTP)最初發(fā)現(xiàn)于腫瘤組織,后來又從其他組織中分離出來。TCTP廣泛表達(dá)于動物、植物及酵母中,其基因序列高度保守。最初認(rèn)為TCTP僅是一類生長相關(guān)蛋白,近年來有研究表明,TCTP具有多種生物學(xué)功能:可作為一種組織胺釋放因子,參與細(xì)胞的生長、分裂和分化等;也可作為一種小分子熱休克蛋白,以分子伴侶的形式保護(hù)細(xì)胞蛋白免受熱休克損

2、傷;同時還可作為一種鈣結(jié)合蛋白,在人類滋養(yǎng)層細(xì)胞中起鈣運輸?shù)淖饔?。另?課題組在小鼠胚胎著床相關(guān)基因文庫研究中發(fā)現(xiàn)TCTP基因在小鼠胚胎著床窗口期子宮內(nèi)膜組織中呈現(xiàn)高表達(dá)。結(jié)合文獻(xiàn)和前期研究工作,我們推測TCTP可能參與了胚胎著床和早期胚胎發(fā)育過程。鑒于TCTP在小鼠胚胎圍著床期的研究還未見報道,本實驗運用qRT-PCR、Western blot和免疫組化等方法對小鼠胚胎圍著床期子宮內(nèi)膜TCTP基因表達(dá)進(jìn)行了分析,并采用子宮角注射實驗初

3、步探討了。TCTP基因的功能。這不僅有助于深入理解TCTP在胚胎著床中的作用,而且為探索胚胎著床的分子機(jī)制提供相關(guān)實驗依據(jù)。
　　 方法：分別采用qRT-PCR法、免疫組化和Western blot法檢測分析孕D1,D2,D3,D4,D5,D6和D7小鼠子宮內(nèi)膜中TCTP mRNA和蛋白的表達(dá)情況。然后以假孕D4和D6的小鼠子宮內(nèi)膜為對照,分別采用qRT-PCR、免疫組化和Western blot法檢測TCTP在著床前(孕D4)

4、和著床后(孕D6)子宮內(nèi)膜中的表達(dá)。最后對孕D3.5小鼠實施子宮角注射TCTP反義寡聚脫氧核苷酸,24 h后取出子宮內(nèi)膜組織,再分別用qRT-PCR、Western blot和免疫組化法檢測TCTP mRNA和蛋白表達(dá)的差異,同時觀察術(shù)后孕D8小鼠子宮中胚胎數(shù)目和形態(tài)的變化以期探討TCTP基因的功能。
　　 結(jié)果：qRT-PCR結(jié)果顯示TCTP mRNA在孕D1～D5天小鼠子宮內(nèi)膜中隨孕天數(shù)的遞增其表達(dá)量逐漸升高,孕D5(著床窗

5、口期)達(dá)到頂峰,隨后孕D6和D7表達(dá)下降。Western blot和免疫組化檢測結(jié)果與qRT-PCR一致。TCTP主要表達(dá)于子宮內(nèi)膜的腔上皮、腺上皮和基質(zhì)細(xì)胞中。TCTP mRNA和蛋白在正常妊娠小鼠著床前(孕D4)和著床后(孕D6)子宮內(nèi)膜中的表達(dá)均高于假孕D4和D6小鼠(*P＜0.05)。在小鼠子宮角一側(cè)注射TCTP反義寡聚脫氧核苷酸后,與另一側(cè)注射TCTP正義寡聚脫氧核苷酸和蒸餾水相比,TCTP mRNA和蛋白的表達(dá)均受到抑制,并