共振瑞利散射測定蛋白質(zhì)和藥物的新方法研究.pdf

1、共振瑞利散射測定蛋白質(zhì)和約物的新方法研究共振瑞利散射測定蛋白質(zhì)和藥物的新方法研究、、————一～一—、——————?！弧蘝—————一摘要共振瑞利散射(resonanceRayleighscattering，RRS)技術(shù)是二十世紀(jì)90年代后彳‘發(fā)展起來的一種新的定量分析技術(shù)。近年來，因其操作簡便、靈敏度高、選擇性好的特點(diǎn)日益受到人們的關(guān)注，在生物大分子(如核酸、蛋白質(zhì))和無機(jī)離子的測定方廟得到越來越廣泛的應(yīng)用。蛋白質(zhì)在一定條件下以大陽

2、離子的形式存在，此時(shí)若有帶相反電荷的陰離子與之結(jié)合則可以導(dǎo)致溶液的散射強(qiáng)度急劇增加，并產(chǎn)生新的RRS光譜?；诖死?，本文又研究出了三種測定蛋白質(zhì)的新體系，考察了體系的RRS光譜特征，主要影響因素，分析化學(xué)特性及其分析應(yīng)用。r～～／藥物分析是分析化學(xué)的一個(gè)重要內(nèi)容，但是將RRS技術(shù)用于藥物分析的研＼究還為數(shù)不多。某些藥物在一定條件下以大陽離子或大陰離子形式存在，同時(shí)某些染料在相同條件下又以帶相反電荷的大陽離子或大陰離子形式存在，二者有可能

3、以靜電引力和疏水作用力相結(jié)合而發(fā)生離子締合反應(yīng)，使RRS大大增強(qiáng)并產(chǎn)生新的RRS光譜。根據(jù)這一原理我們研究了兩種新藥——鹽酸雷洛昔芬和西地那非分別與兩類酸性雙偶氮染料的相互作用，從中找出了測定上述藥物的新體系，對有關(guān)體系的RRS光譜特征，主要影響因素，分析化學(xué)特性及其分析應(yīng)用進(jìn)行了研究，從而建立了共振瑞利散射法測定鹽酸雷洛昔芬和西地那非的簡便、快速、靈敏的新方法?！承┳兩犭p偶氮染料蛋白質(zhì)體系在pH34—40的檸檬酸鈉鹽酸緩沖溶液中，

4、偶氮胂M(AAM)、偶氮氯膦Ⅲ(CPAIU)和I氯磺酚S(CSPS)等含胂酸基、膦酸基和O，O’一二羥基的變色酸偶氮染料以及蛋白質(zhì)本身的共振瑞利散射(RRS)均f‘分微弱，但這些染料與蛋白質(zhì)結(jié)合形成復(fù)合物時(shí)能使RRS急劇增強(qiáng)，在400～470nm的范圍內(nèi)呈現(xiàn)高的散射強(qiáng)度。其最大散射波長均位于470rim處。并且散射強(qiáng)度分別在O～361tgmL。(CPAⅢ體系)、0～38pgmL。(AAM體系)和O～48pgmL。(CSPS體系)的范圍內(nèi)

5、與牛m清門蛋(3(BSA)的濃度成打i比，方法具有高靈敏度，對于BSA的檢出限(o=3時(shí))、兆振瑞利散射測定蛋白質(zhì)和藥物的新方法研究大散射峰；曲利本紅體系在310～530nm范圍內(nèi)呈現(xiàn)高的散射強(qiáng)度，最大散射峰位于396nm處。散射強(qiáng)度分別在O～83pgmL～(EB—Ralo體系)和肌631xgmL’1(TR—Ralo體系)的范圍內(nèi)與雷洛昔芬的濃度成線性關(guān)系，方法具有高靈敏度，對雷洛昔芬的檢出限(O=3時(shí))分別189ngmL4和109ng

6、mL一。考察了共存物質(zhì)的影響，表明方法具有較好的選擇性。該方法還具有快速、簡便、穩(wěn)定的特點(diǎn)，用于合成樣品的分析，效果不錯(cuò)。五某些變色酸雙偶氮染料雷洛昔芬體系氯磺酚s、偶氮氯膦Ⅲ和雷洛昔芬本身在醋酸鈉鹽酸緩沖溶液中都只在470nm附近有很小的散射信號，可是當(dāng)pH為18時(shí)，氯磺酚s可以與雷洛昔芬結(jié)合，除470rtm處的RRS明顯增強(qiáng)外，在350500nm范圍內(nèi)產(chǎn)生了新的強(qiáng)度更高的共振瑞利散射，最大散射峰位于396nm處；而偶氮氯膦Ⅲ與雷洛昔

7、芬則在pHI1時(shí)反應(yīng)不僅使470nln處的共振瑞利散射明顯增強(qiáng)，并且還產(chǎn)生新的RRS信號，在400500nm范圍內(nèi)呈現(xiàn)高的散射強(qiáng)度，最大散射峰位于468nm處。共振瑞利散射強(qiáng)度分別在O～9499mL～(CSPSRalo體系)和肛831tgmL?！?CPA111Ralo體系)的范圍內(nèi)與雷洛昔芬的濃度呈正比，方法具有很高的靈敏度，對雷洛昔芬的檢出限(O=3時(shí))分別為149ngmLll和948ngmL～。我們研究了體系的RRS光譜和吸收光譜特

8、征，反應(yīng)的適宜條件和主要影響因素，同時(shí)考察了共存物質(zhì)的影響，常見金屬和糖類均不干擾測定。方法靈敏、簡便、快速、選擇性好。六依文思藍(lán)西地那非體系在酸性介質(zhì)中，依文思藍(lán)能與西地那非反應(yīng)導(dǎo)致溶液的RRS明顯增強(qiáng)，并產(chǎn)新的RRS光譜。在300～600nm范圍內(nèi)呈現(xiàn)強(qiáng)的散射強(qiáng)度，并且分別在365nm和550nm處出現(xiàn)了兩個(gè)明顯的較大的散射峰，而以365nm處的散射信號最強(qiáng)。共振瑞利散射強(qiáng)度在0～107ttgmL1的范圍內(nèi)與西地那非的濃度呈正比，方