F蛋白誘導大鼠肝移植免疫耐受的初步研究.pdf

1、隨著肝移植技術(shù)的不斷進步和完善，使得越來越多的終末期肝病患者的生存期得到了很大程度的延長。但急性排斥反應(Acute Rejection，AR)仍然是肝移植術(shù)后最嚴重的并發(fā)癥之一，其發(fā)生率仍然高達40％-60％，因此免疫耐受仍然是肝移植研究的重點之一。免疫耐受的機制有很多學說，各種高效免疫抑制劑也在不斷推出，但是近年來越來越多的關(guān)注肝臟特異性蛋白(F蛋白)誘導肝移植術(shù)后免疫耐受的研究，使我們對肝移植免疫耐受的發(fā)生、發(fā)展有了更進一步的理解

2、。
　　 F蛋白的表達及純化。
　　 本文在前人研究的基礎上，將F蛋白原核表達載體pET-15b轉(zhuǎn)化的大腸桿菌表達菌BL21(DE3)pLysS，用IPTG誘導其表達，表達后通過親和層析柱(Ni2+-charged IDA His-blnd column)純化，用十二烷基硫酸鈉-聚丙稀酞胺凝膠電泳與免疫印跡(Western blot)對其進行檢測。人F蛋白的表達菌株BL21(DE3)pLysS表達后的全菌蛋白進行SDS-

3、PAGE電泳檢測，目的條帶分子量大小約為43kD，與文獻報導一致。western-blot顯示純化后的F蛋白與豚鼠抗人提純F蛋白多克隆抗血清反應為陽性，說明我們經(jīng)基因工程方法得到的純化的F蛋白具有免疫活性。
　　 F蛋白誘導大鼠肝移植免疫耐受的初步研究。
　　 為了觀察兩種不同品系即近交系Wistar和封閉群SD大鼠原位肝移植術(shù)后的急性排斥反應及F蛋白誘導肝移植免疫耐受的情況。我們將健康雄性清潔的近交系Wistar和封閉

4、群SD大鼠隨機分為3組，A：同基因?qū)φ战M：SD→SD；B：急性排斥組：Wistar→SD；C：F蛋白干預組：術(shù)前一周胸腺內(nèi)注射0.4mg。采用Kamada二袖套法，建立上述Wistar和SD組合之間的肝移植模型。A、B和C組受體分別于術(shù)后3d、6d、9d及100d，四個時間點各殺死三只大鼠，收集肝組織和血清分別做相應檢測，另留取部分新鮮肝組織立即置入液氮中保存?zhèn)溆?。剩余的大鼠用于觀察肝移植術(shù)后長期生存率。實驗過程中共完成108例次大鼠原

5、位肝移植(ratorthotopic liver transplantation，ROLT)操作，總的手術(shù)成功率為62.96％(68/108)，其中模型訓練的前期完成45例，24h成活率僅24.44％(11/45)以后隨著手術(shù)技巧成熟，手術(shù)成功率逐漸達到90％以上。大鼠肝移植手術(shù)死亡的主要原因為出血、麻醉意外、無肝期太長、血栓形成等。A組同基因?qū)φ战M，術(shù)后組織學檢查無排斤反應表現(xiàn)。B組急性排斥組自術(shù)后3d開始，出現(xiàn)Ⅰ級排斥反應，6d以后