多頭帶絳蟲硫氧還蛋白過氧化物酶基因的克隆、表達及抗原性研究.pdf

1、甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文多頭帶絳蟲硫氧還蛋白過氧化物酶基因的克隆、表達及抗原性研究姓名：李永光申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：預(yù)防獸醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師：付寶權(quán);賈寧20090601甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)2 0 0 9 屆碩士學(xué)位論文S u m m a r yC e r e b r a l c o e n u r o s i s ，w h i c hi s ak i n do fs e r i o u s f a t a lz o o n o s e s ，i

2、s c a u s e db yt h ep a r a s i t i s mo f C o e n u r u sc e r e b r a l i s ，t h el a r v a eo f T a e n i a m u l t i c e p si nc e n t r a ln e r v e t i s s u eo f h o s t ．C o e n u r o s i s i sw i d l y s p r e

3、a di nC h i n a , e s p e c i a l l y i np a s t u r e f i e l d so f N o r t h w e s t e r nC h i n a , N o r t h e r n C h i n aa n d N o r t h e s t e m C h i n a w i t ha r i s i n gm o r b i d i t y ．T h i s d i s e

4、 a s en o to n l y c a u s e se n o r m o u se c o n o m i c l o s s i n h u s b a n d r yp r o d u c t i o nb u ta l s o i s at h r e a t t oh u m a n h e a t h ．T h i o r e d o x i np e r o x i d a s e ( T P x ) ，a m e

5、 m b e r o f p e r o x i r e d o x i n ( P r x ) f a m i l y , i sah y d r o s u l f u r y ls p e c i f i c a n t i o x i d a n t w h i c hc o u l dr e m o v et h e e x c e s s r e a c t i v eo x y g e ns p e c i e sp r

6、o d u c e db yt h en o r m a lc e l l so f o r g a n i s m ．T P xo f p a r a s i t ec o u l d p r o t e c ta g a i n s tt h ed a m a g e o f r e a c t i v eo x y g e n s p e c i e sf r o m h o s ta n d p a r a s i t em e

7、 t a b o l i s m ，f u n c t i o n i n gi nt h e e v a s i o no f h o s t i m m u n i t y ．T h es p e c i f i cp r i m e r sd e r i v e df r o mZ s o l i u mP r x g e n ew e r eu s e dt oa m p l i f yt h eZm u l t i c e p

8、 st h i o r e d o x i np e r o x i d a s e ( T m T P x ) e D N A f r a g m e n t f r o mC o e n u r u sc e r e b r a l 括i s o l a t e d f r o mn a t u r a l l y i n f e c t e ds h e e p i nJ i n g t a ic o u n t y ，G a n

9、 s up r o v i n c e ．S e q u e n c ea n a l y s i ss h o w e d t h a tT m T P x g e n e f r a g m e n t h a d 9 9 ％i d e n t i t y t oT a H c 2 - D ll m R N A o f Za s i a t i c a ( E F 4 2 0 3 7 2 ) a n d9 6 ％i d e n t

10、i t yt o Zs o l i u mP r x ( A Y 7 2 8 0 9 2 ) ．T h er e c o m b i n a n te x p r e s s i o np l a s m i dp G E X - 4 T - T m T P x W a sc o n s t r u c t e da n dt r a n s f o r m e d t oE c o l iB L 2 1 ，t h e ni n d u

11、 c e db yI P T Gt o e x p r e s st h er e c o m b i n a n tp r o t e i n ．T h ee x p r e s s e d p r o d u c tW a sa n a l y z e db yS D S ·P A G Ea n d a 4 3k D a f u s i o np r o t e i nw a ss u c c e s s f u l l

12、ye x p r e s s e d ．T h ep u r i f i e dr e c o m b i n a n tp r o t e i nw a su s e dt o i m m u n i z er a b b i ta n d t h er e c o m b i n a n tp r o t e i nc o u l d d e t e c tt h e a n t i b o d y r e s p o n s ei

13、 n t h e i m m u n i z e dr a b b i t a n dt h e a n t i b o d yl e v e li n c r e a s e d 、Ⅳi mt i m eo f i m m u n i z a t i o n ．F u r t h e r m o r e ，t h es p e c i f i cr a b b i ta n t i s e r u ma g a i n s tt h

14、e p u r i f i e d T m T P xr e c o m b i n a n t p r o t e i n c o u l d s p e c i f i c l y r e a c t e d t o t h e c o e n u r u sp r o t o s c o l e c e s a n t i g e n , s u g g e s t i n g t h a t T m T P xr e c o m

15、 b i n a n t p r o t e i n h a d ag o o di m m u n o g e n i c i t y ．F u r t h e r m o r e ，s p e c i f i c p r i m e r s w e r e d e s i g n e d a c c o r d i n g t oT a H c 2 一D ll m R N A s e q u e n c ea n d a 6 14

16、b pf u l ll e n g t he D N A w a sa m p l y f i e d b yR T - P C R ,w h i c hc o n t a i n e d a 5 9 1 b pf u l l O R F e n c o d i n g19 6a a w i t ha m o l e c u l a rw e i g h t o f 2 0 ．6 9k D aa n d a l li s o e l e

17、 c t r i cp o i n to f 7 ．61 ．B i o i n f o r m a t i c sa n a l y s i si n d i c a t e dt h a t T m T P x h a dat y p i c a l2 - C y sP r xc o n s e r v e dd o m a i na n d t h ep h y l o g e n e t i ca n a l y s i so f

18、 t h ek n o w n P r xo fT a e n i a s p e c i e sr e v e a l e d t h a t Z m u l t i c e p sh a dt h e c l o s e s tr e l a t i o n s h i pt o 7 = a s i a t i c a ，f o l l o w e d b yT s o l i u ma n dZ c r a s s i c e p

19、 s ，Eg r a n u l o s u sa n dE m u l t i l o c u l a r i s ．T h e s ed a t aw i l l l a yt h ef o u n d a t i o nf o r t h ef u r t h e rs t u d y o f t h ef u n c t i o no f T m T P x ．K e yw o r d s ：T a e n i am u l t