香豬源性雙歧桿菌的耐氧馴化及高密度發(fā)酵的研究.pdf

1、雙歧桿菌已成為人類公認的一種益生菌，具有降膽固醇、改善機體腸道微生物的平衡，調(diào)節(jié)機體免疫反應(yīng)等多項生理功能。本課題從貴州特色資源香豬腸道內(nèi)溶物中篩選得到了一株動物雙歧桿菌乳亞種BZ11，并測定了其耐氧性、耐酸耐膽鹽、降膽固醇率、抑菌性、粘附性等方面的生理性能；針對雙歧桿菌專性厭氧特性采用三種方法進行了耐氧馴化，并對馴化后的菌株分別進行了不同方式的分批培養(yǎng)和分批補料培養(yǎng)，根據(jù)菌株在培養(yǎng)過程中的生長曲線確定出最有效的高密度發(fā)酵方式。得到以下

2、主要結(jié)論：
　　（1）菌株BZ11在有氧條件下培養(yǎng)24 h后活菌數(shù)可以達到3.80×108cfu/mL，即該菌株本身就具有較好的耐氧性能；菌株在pH3條件下培養(yǎng)2 h存活率達到（98.65±0.11）％，在含0.3%膽鹽濃度的培養(yǎng)基中培養(yǎng)24 h后存活率仍能達到80%以上，且均顯著高于所選用的對照菌株動物雙歧桿菌BZ25和金雙歧，表明該株菌具有較好的耐酸、耐膽鹽特性；能夠粘附在Caco-2細胞表面，粘附細菌數(shù)為（6.66±0.32

3、） cfu/cell。體外對膽固醇降解率達到（27.10±0.92）%；菌株BZ11對大部分抗生素較敏感；菌株BZ11的發(fā)酵液對六種病原菌具有不同的抑制效果，小鼠灌胃實驗結(jié)果表明菌株BZ11無急性毒性。
　?。?）為了提高動物雙歧桿菌乳亞種BZ11對有氧環(huán)境的耐受性，采用逐漸增加培養(yǎng)基中的氧分壓和有氧、厭氧條件下交替培養(yǎng)兩種方案對其進行了耐氧馴化，并通過化學(xué)誘變選育耐氧菌株。通過對馴化前后菌株的生長特性進行分析得出逐漸增加培養(yǎng)基中

4、的氧分壓的馴化方案取得了更好的效果。經(jīng)最優(yōu)方案馴化后的菌株在有氧條件下培養(yǎng)20 h后，活菌數(shù)可達到6.30×108 cfu/mL，是初始菌株的2.24倍。馴化后菌株的降膽固醇率為（27.31±0.80）%，與初始菌株相比沒有顯著性差異（p＞0.05）。通過鑒定得出，動物雙歧桿菌乳亞種BZ11在耐氧馴化前后保持了相似的形態(tài)及生理生化特征。因此，馴化后的菌株有望作為一株潛在益生菌被開發(fā)利用。
　　（3）采用了含有胡蘿卜汁和卷心菜汁的優(yōu)