PI3K-Akt信號(hào)通路參與白藜蘆醇對(duì)大鼠缺血再灌注心肌的保護(hù)作用.pdf

1、目的：
　　探討白藜蘆醇(Resveratrol，Res)對(duì)大鼠缺血再灌注心肌損傷的保護(hù)作用及對(duì)心肌細(xì)胞凋亡的抑制作用與PI3K-Akt信號(hào)通路的相關(guān)性，從信號(hào)通路的角度闡明該藥的心肌保護(hù)作用的機(jī)制，為臨床應(yīng)用提供新的理論依據(jù)；通過藥物機(jī)制研究為揭示中醫(yī)治療理論內(nèi)涵提供線索；尋找白藜蘆醇可能的作用靶標(biāo)，為新藥研發(fā)提供理論依據(jù)。
　　方法：
　　50只成年健康雄性SD大鼠，體重230-250g，隨機(jī)分為5組(n=10)，

2、即假手術(shù)組(SH組)、缺血再灌注組(I/R組)、白藜蘆醇處理組(Res組)、白藜蘆醇處理+渥曼青霉素組(Res+Wom組)、缺血再灌注+渥曼青霉素組(I/R+Wom組)。采用結(jié)扎冠狀動(dòng)脈左前降支(leftanterior descending coronary artery，LAD)45 min，再灌注120 min的方法復(fù)制大鼠心肌缺血再灌注實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ汀?1)SH組：開胸，在左冠狀動(dòng)脈前降支下穿線但不結(jié)扎，穿線時(shí)及第46分鐘取下穿線時(shí)由

3、舌下靜脈分別注入生理鹽水1ml；(2)IR組：結(jié)扎左冠狀動(dòng)脈前降支45分鐘，造成急性心肌缺血模型，再灌注120分鐘，結(jié)扎時(shí)及再灌注前1分鐘由舌下靜脈注入生理鹽水1ml，余同假手術(shù)組；(3)Res組：結(jié)扎時(shí)及再灌注前1分鐘由舌下靜脈注入白藜蘆醇溶液20mg/Kg(約1ml)，余同假手術(shù)組；(4)Res+Wom組：結(jié)扎時(shí)及再灌注前1分鐘由舌下靜脈注入白藜蘆醇溶液20mg/Kg及渥曼青霉素(約1ml)，余同Res組；(5)IR+Wom組：結(jié)扎

4、時(shí)及再灌注前1分鐘由舌下靜脈注入1ml生理鹽水及渥曼青霉素，余同IR組。分別于缺血前、缺血30 min以及再灌注60、90、120 min時(shí)，測(cè)定左心室收縮壓(Left ventricular systolic pressure，LVSP)、左心室舒張末期壓(Left ventricular end-diastolic pressure，LVEDP)、左室內(nèi)壓力變化最大上升和下降速率(Maximum rates of leftventr

5、icular pressure development and decay，±dp/dtmax)；化學(xué)比色法測(cè)定心肌一氧化氮(Nitric oxide，NO)和一氧化氮合酶(Nitric-oxide synthase，NOS)的含量；免疫組化測(cè)定心肌組織中Bcl-2、Bax蛋白的表達(dá)；TUNEL法檢測(cè)心肌細(xì)胞凋亡程度；Western blot測(cè)定心肌組織總Akt(即T-Akt)及磷酸化Akt(即p-Akt)信號(hào)蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)

6、果：
　　1、白藜蘆醇對(duì)大鼠心肌缺血再灌注過程中的血流動(dòng)力學(xué)的影響
　　各組大鼠的體重、年齡相近，身體健康，缺血前血流動(dòng)力學(xué)指標(biāo)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。與SH組比較，其余各組各時(shí)點(diǎn)LVSP和+dp/dtmax呈進(jìn)行性下降，LVEDP和-dp/dtmaxx呈進(jìn)行性升高(P<0.05)。與IR組比較，Res組各時(shí)間點(diǎn)LVSP、+dp/dtmax升高，LVEDP、-dp/dtmax降低(P<0.05)，Res+Wom組和

7、IR+Wom組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；與Res組比較，Res+Wom組和IR+Wom組各時(shí)間點(diǎn)的LVSP、+dp/dtmax明顯降低(P<0.05)，LVEDP、-dp/dtmax明顯升高(P<0.05)。
　　2、白藜蘆醇對(duì)心肌組織中NO和NOS表達(dá)的影響
　　與IR組比較，Res組NO和NOS的含量明顯增加(P<0.05)；Res+Wom組和IR+Wom組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；與Res組比較，Res

8、+Wom組和IR+Wom組NO和NOS的含量明顯降低(P<0.05)。
　　3、白藜蘆醇對(duì)心肌組織中Bcl-2、Bax蛋白的表達(dá)的影響
　　與I/R組相比，Res組Bc1-2蛋白表達(dá)顯著升高(P<0.05)，Bax/Bc1-2低于I/R組(P<0.05)，加入PI3K-Akt信號(hào)通路的特異性阻斷劑渥曼青霉素后，與Res組相比，Bc1-2蛋白表達(dá)顯著降低(P<0.05)，Bax/Bc1-2高于Res組；Res+Wom組與I/R

9、組及Wom組相比，Bc1-2蛋白的表達(dá)無顯著差異(P>0.05)，Bax/Bc1-2無顯著性差異(P>0.05)
　　4、白藜蘆醇對(duì)大鼠缺血再灌注心肌細(xì)胞凋亡的影響
　　與IR組比較，Res組心肌細(xì)胞凋亡降低(P<0.05)，Res+Wom組和IR+Wom組細(xì)胞凋亡差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；與Res組比較，Res+Wom組和IR+Wom組心肌細(xì)胞凋亡增加(P<0.05)。
　　5、白藜蘆醇對(duì)心肌組織T-Akt及P-Akt信號(hào)蛋

10、白的表達(dá)的影響
　　據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，各組T-Akt差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；與SH組比較，IR組和Res組心肌組織P-Akt蛋白表達(dá)增加(P<0.05)；與IR組比較，Res組心肌組織p-Akt蛋白表達(dá)明顯增加(P<0.05)；與Res組比較，Res+Wom組和IR+Wom組心肌組織p-Akt蛋白表達(dá)水平降低(P<0.05)。結(jié)果表明白藜蘆醇可能是通過激活PI3K-Akt信號(hào)通路，增3HPI3K-Akt信號(hào)通路上的重要靶點(diǎn)Akt的磷酸化即