基于大豆過氧化物酶標(biāo)記免疫蛋白芯片研制.pdf

1、蛋白芯片是將不同種類的蛋白質(zhì)分子固定在固相芯片表面，由于每一種蛋白分子都排列成有序的點(diǎn)陣，在不同的位置上固定相應(yīng)的蛋白，根據(jù)確定的蛋白位點(diǎn)與待檢測的分子的對應(yīng)關(guān)系，可以在一次檢測反應(yīng)中實(shí)現(xiàn)多種分子的同時檢測，具有一次性檢測樣品大，樣品消耗低，檢測成本低，檢測結(jié)果準(zhǔn)等優(yōu)點(diǎn)，對于多種生物標(biāo)志物的聯(lián)合篩查具有重要的意義。
　　本文以硝酸纖維素膜(NC膜)為固相載體，同時將兩種或多種抗體固定在NC膜表面，制備了血清學(xué)標(biāo)志物多組分組合芯片，

2、使用大豆過氧化氫酶(SBP)代替常規(guī)的辣根過氧化氫酶(HRP)作為標(biāo)記酶制備生物探針，通過夾心免疫方法將待測目標(biāo)物和上述生物探針捕獲到NC膜表面，利用化學(xué)發(fā)光法檢測目標(biāo)物的濃度，建立基于大豆過氧物酶標(biāo)記探針的目標(biāo)分析物的化學(xué)發(fā)光分析方法。具體研究工作如下:
　　(1)構(gòu)建唐氏綜合征產(chǎn)前篩查血清學(xué)組合芯片，實(shí)現(xiàn)對游離雌三醇(uE3)、抑制素A(Inhibin-A)、甲胎蛋白(AFP)、人絨毛膜促性腺激素β亞單位(β-HCG)四項(xiàng)血清

3、學(xué)標(biāo)志物的同時檢測。在NC膜表面的不同位置同時固定四種捕獲抗體，構(gòu)建出四種抗體的組合芯片;通過夾心免疫反應(yīng)將四種待測抗原，生物素標(biāo)記的對應(yīng)檢測抗體，SBP標(biāo)記的鏈酶親和素(SA)依次結(jié)合到芯片表面，利用大豆過氧化物酶催化化學(xué)發(fā)光反應(yīng)，使用化學(xué)發(fā)光免疫成像的方法實(shí)現(xiàn)對四種抗原的同時檢測。
　　(2)在上述多組分檢測芯片的基礎(chǔ)上，將總前列腺特異抗原(t-PSA)和游離前列腺特異抗原(f-PSA)有序的固定在NC膜上，制備了基于SBP標(biāo)