松塔多糖的分離純化、結(jié)構(gòu)鑒定及抗氧化活性研究.pdf

1、紅松是松科松屬植物,在我國東北部分布廣泛。松的藥用歷史悠久,《本草綱目》等書均有記載。松塔是松科松屬植物的球果,具有祛痰、祛風(fēng)、潤腸、止咳平喘和抗菌消炎等功效,具有很高的利用價(jià)值。據(jù)研究表明,松塔的水提物具有抗氧化、抗菌、抗腫瘤等多種功效,但是在現(xiàn)代加工過程中,松塔往往作為加工副產(chǎn)品而廢棄不用,造成資源浪費(fèi)。本文從紅松松塔中提取多糖,經(jīng)過純化后得到單一的多糖組分,對(duì)該單一組分進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定。對(duì)不同的松塔多糖進(jìn)行抗氧化活性研究。為系統(tǒng)研究松

2、塔多糖的化學(xué)結(jié)構(gòu)和生物活性奠定了堅(jiān)實(shí)的理論基礎(chǔ),為松塔多糖的應(yīng)用提供了理論依據(jù)。本文主要研究成果如下:
　　從紅松、華山松和樟子松三種松樹的松塔中提取多糖成分。經(jīng)過三氯乙酸脫蛋白,活性炭脫色得到較純的多糖。利用儀器和化學(xué)方法測(cè)定三種松塔多糖的各種理化指標(biāo),包括多糖含量、糖醛酸含量、單糖組成、多酚含量、氨基酸組成、分子量以及紅外吸收光譜。測(cè)定結(jié)果表明,三種松塔多糖均是混合物,其中糖醛酸含量約占50％,中性糖含量約占40%,氨基酸和多

3、酚成分不足2%。單糖組成分析結(jié)果表明華山松和樟子松松塔粗多糖的單糖組成較為接近,且與紅松松塔粗多糖的單糖組成有明顯的區(qū)別。
　　通過水提醇沉的方式從紅松松塔多糖中提取松塔粗多糖,經(jīng)過三氯乙酸脫蛋白,活性炭脫色,將得到的多糖用乙醇進(jìn)行分級(jí)。得到30%乙醇沉淀的多糖組分PKP-A。該組分多糖經(jīng)過DEAE-52陰離子交換柱和Sephadex G-200凝膠柱分離得到多糖組分PKP-A-3b,回收率為33%。通過高效液相色譜鑒定其為單一組

4、分,分子量為286.59kDa。采用各種化學(xué)和儀器方法對(duì)PKP-A-3b進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定。得到的結(jié)論如下:UV吸收和紅外光譜測(cè)定知其不具有結(jié)合的核糖和蛋白,含有糖醛酸;單糖組成分析表明,PKP-A-3b由D-核糖,L-鼠李糖,L-阿拉伯糖,D-木糖,D-甘露糖,D-葡萄糖和D-半乳糖七種單糖組成,摩爾比為0.21:0.29:0.50:0.25:0.38:0.78:1.25;高碘酸氧化實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,紅松松塔多糖PKP-A-3b中主要存在1→2

5、或1→2,6或1→4或1→4,6位連接的糖苷鍵;Smith降解和氣相色譜分析結(jié)果表明,七種單糖在多糖中的連接方式均有不被高碘酸鈉氧化的鍵型;1HNMR和13CNMR譜圖表明,該多糖組分的單糖殘基中包含α-和β-兩種糖苷鍵類型。且主要含有三種異頭碳,這三種異頭碳的類型可能歸屬于→4)-α-D-GalpA-(1→、T-α-D-Galp-(1→和→2)-α-L-Rhap-(1→。在175.57和171.25處的共振吸收峰說明多糖中含有糖醛酸和

6、脂類結(jié)構(gòu)。
　　對(duì)紅松、樟子松和華山松三種松塔粗多糖的抗氧化能力進(jìn)行測(cè)定。得到的結(jié)論如下:紅松、華山松和樟子松三種松塔多糖均具有很強(qiáng)的ABTS?+自由基清除能力和羥基自由基清除能力。其中紅松松塔多糖的自由基清除能力最強(qiáng),華山松松塔多糖次之,樟子松松塔多糖最弱。但是三種松塔多糖的自由基清除率均小于VC。當(dāng)紅松松塔多糖的濃度達(dá)到30mg/mL的時(shí)候,自由基清除率均高于50%。說明紅松松塔多糖具有很強(qiáng)的自由基清除能力,具有開發(fā)成天然抗氧

7、化劑的潛力,可對(duì)其進(jìn)行進(jìn)一步的研究。三種松塔多糖的不同自由基清除能力可能與其不同的糖醛酸含量和單糖組成有關(guān)。三種松塔多糖對(duì)超氧陰離子自由基均沒有明顯清除作用。用不同濃度的乙醇從紅松松塔多糖中沉淀出來的五種多糖組分,對(duì)這五種組分的抗氧化活性進(jìn)行測(cè)定。試驗(yàn)結(jié)果表明,五種多糖組分對(duì)ABTS·+自由基和羥基自由基均具有很好的清除能力,且自由基清除率均隨著多糖濃度的升高而升高。在ABTS·+自由基清除試驗(yàn)中,五種多糖組分的清除能力排序是PKP-E