谷氨酸-谷氨酸受體系統(tǒng)改善骨質疏松的細胞和動物實驗研究.pdf

1、第一部分：Ⅲ型代謝型谷氨酸受體對原代大鼠顱骨成骨細胞的影響
　　 目的：原代新生大鼠顱骨來源的成骨細胞上有Ⅲ型代謝型谷氨酸受體的表達，本研究的目的是觀察Ⅲ型代謝型谷氨酸受體在調節(jié)成骨細胞功能方面的作用。
　　 材料和方法：
　　 取新生（<24h）SD大鼠顱骨細胞進行成骨細胞培養(yǎng)，取2-3代成骨細胞進行鋪板，給予Ⅲ型代謝型谷氨酸受體激動劑和阻斷劑處理，分別進行堿性磷酸酶測試和礦化檢測，隨后取處理48小時的細胞進行

2、RNA抽提，RT-PCR，觀察OPG和RANKL的mRNA表達改變情況。
　　 結果：
　　 原代SD大鼠成骨細胞上有Ⅲ型代謝型谷氨酸受體的表達，給予特異性激動劑處理48小時后，堿性磷酸酶活性增加了，在100uM時，ALP活性最高，有統(tǒng)計學意義；相應的細胞毒性試驗和增殖試驗未發(fā)現(xiàn)明顯差異，阻斷劑則表現(xiàn)出相反的結果；成骨細胞在連續(xù)藥物處理18天后的礦化結節(jié)顯示，激動劑促進礦化結節(jié)的生成，而阻斷劑則抑制礦化結節(jié)的生成；進一步

3、研究發(fā)現(xiàn)，激動劑處理48小時的成骨細胞，OPG的mRNA表達水平增加了，RANKL的mRNA表達水平降低了；阻斷劑則呈現(xiàn)相反的結果.
　　 結論：原代大鼠顱骨來源的成骨細胞表達Ⅲ型代謝型谷氨酸受體；給予特異性激動劑處理可增強成骨活性，促進成骨細胞分化，阻斷劑則抑制這一進程。
　　 第二部分：谷氨酸對去卵巢小鼠的骨量及骨生物力學的影響
　　 目的：盡管體外細胞實驗提示谷氨酸受體對成骨，破骨細胞功能起著一定作用，但是

4、并沒有足夠的體內實驗和數(shù)據支持這一結論。本研究目的就是通過動物體內實驗觀察谷氨酸是否參與了體內骨骼重建，影響骨生物力學指標，從而改善骨骼質量。
　　 材料和方法：
　　 取8周齡雌性小鼠，隨機分為兩組，分別進行去卵巢手術（OVX）和假手術（SHAM）；利用雙能X線吸收法（DEXA，hologic discovery LAfor small animal，USA）測小鼠全身骨密度，利用三點彎曲法（instron 5569，

5、GERMAN）進行骨生物力學測試，觀察骨骼質量變化情況，在骨生物力學指標（如最大值彎曲載荷，斷裂時能量裂值等）出現(xiàn)下降趨勢時，給予小鼠腹腔注射谷氨酸（1mg/kg/day）一個月，再分別測全身骨密度和骨生物力學，觀察骨骼改善情況。
　　 結果：
　　 OVX小鼠于去卵巢6個月后先后出現(xiàn)骨生物力學指標（最大值彎曲載荷（N）和斷裂時的能量值（mJ））的下降和骨密度的下降（P<0.05）。
　　 在術后6個月時給予OV