擬南芥MYB轉(zhuǎn)錄因子AtMYB50與AtMYB61互作及其在調(diào)控鉛耐受性中的作用.pdf

1、食品安全是食品行業(yè)的重中之重，而重金屬污染是威脅食品安全的主要因素之一。土壤污染重金屬可通過(guò)植物吸收進(jìn)入食物鏈進(jìn)而對(duì)人類的健康造成了極大的威脅。因此，利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)降低農(nóng)作物對(duì)土壤污染重金屬的積累具有重要的理論意義和實(shí)踐價(jià)值，而此項(xiàng)工作的重點(diǎn)在于對(duì)植物耐受重金屬毒害及其積累的分子調(diào)控機(jī)理的認(rèn)識(shí)。
　　在前期研究中，我們發(fā)現(xiàn)兩個(gè)涉及植物對(duì)鉛（Pb）脅迫耐受的調(diào)控基因AtMYB50和AtMYB61。這兩個(gè)基因是MYB轉(zhuǎn)錄因子家族中的R

2、2R3亞類成員，具有非常近的親緣關(guān)系。初步研究表明，AtMYB50和AtMYB61基因可能通過(guò)負(fù)調(diào)節(jié)一個(gè)編碼Pb特異性離子泵的基因AtPDR12轉(zhuǎn)錄進(jìn)而控制Pb的積累來(lái)調(diào)節(jié)Pb脅迫的耐受性。因此，我們推測(cè)：AtMYB50和AtMYB61對(duì)Pb脅迫耐受的調(diào)節(jié)是否形成異源二聚體直接調(diào)控下游靶基因AtPDR12轉(zhuǎn)錄。本研究主要研究結(jié)果如下：
　?。?）利用酵母雙雜交技術(shù)對(duì)AtMYB50和AtMYB61蛋白是否具有相互作用進(jìn)行研究：構(gòu)建了

3、pEG202-AtMYB50、pJG4-5-AtMYB50、pEG202-AtMYB61、pJG4-5-AtMYB61四個(gè)酵母雙雜載體。在AtMYB50作為誘餌蛋白AtMYB61為靶蛋白和AtMYB61作為誘餌蛋白AtMYB50為靶蛋白的情況下都檢測(cè)到報(bào)告基因的表達(dá)，證實(shí)了AtMYB50和AtMYB61兩者存在相互作用。
　　（2）在酵母雙雜系統(tǒng)中，AtMYB50和AtMYB61兩個(gè)蛋白作為轉(zhuǎn)錄因子沒有激活下游報(bào)告基因，表明AtM

4、YB50和AtMYB61可能是轉(zhuǎn)錄抑制因子。
　?。?）為進(jìn)一步驗(yàn)證兩者之間的相互作用，我們還構(gòu)建了AtMYB50和AtMYB61的原核表達(dá)載體，并進(jìn)行表達(dá)獲得了AtMYB50和AtMYB61融合蛋白，為進(jìn)一步利用pulldown技術(shù)驗(yàn)證其體外相互作用的提供了基礎(chǔ)。
　　（4）為確定AtMYB50和AtMYB61是否直接與AtPDR12基因啟動(dòng)子結(jié)合，構(gòu)建帶有AtMYB50－GFP和AtMYB61－GFP的轉(zhuǎn)基因株系，為進(jìn)一