產長春胺類化合物植物內生真菌發(fā)酵及次級代謝產物的基礎研究.pdf

1、長春胺及其衍生化合物在治療心腦血管疾病和老年癡呆癥等方面有著顯著療效，具有廣闊的市場前景。目前，國內的長春胺類藥物分子大部分還是依靠小蔓長春花的提取物，以及以此為原料的半合成制備。由于受到植物原料來源有限的限制，原料藥成本高，不能滿足市場需求。本論文從夾竹桃科植物中篩選出能夠產長春胺類化合物的植物內生真菌，對篩選出的內生真菌其長春胺類化合物的表達特性進行初步研究。
　　本論文研究主要分為以下幾部分:
　　(1)產長春胺類化合

2、物內生真菌的篩選。利用薄層色譜(TLC)、液質聯用(LC-MS)分析方法對分離的植物內生真菌菌株的次級代謝產物進行初步的定性分析，篩選具有長春胺類化合物合成能力的菌株;
　　(2)以篩選的菌株為對象，研究影響長春胺類化合物的因素，利用響應曲面法對目標菌株的發(fā)酵條件進行優(yōu)化，選出優(yōu)化的發(fā)酵條件，并印證，提高目標產物的產率;
　　(3)次生代謝產物的純化方法試驗。
　　研究結果顯示菌株VINI-6的代謝產物中具有與對照品基

3、長春胺相似的TLC位移值，初步判斷是與對照品有相似的物質;LC-MS分析結果顯示目標產物的出峰時間為2.21min，且質譜圖顯示在出峰處含有分子數367的物質，與乙基長春胺相符;以發(fā)酵時間、發(fā)酵溫度、發(fā)酵穩(wěn)定期后的pH三個因素進行Box-Benhnken實驗設計，利用Design-Expert軟件進行分析，最終得出發(fā)酵溫度26.2℃、發(fā)酵時間7.56d、穩(wěn)定期后pH為3.2時菌株VINI-6的長春胺類化合物產量最高，驗證后常量約為70.