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文檔簡介
1、中國農業(yè)大學博士學位論文小麥K型細胞質雄性不育育性相關基因片段及TaLonl基因的分離與克隆姓名:劉立科申請學位級別:博士專業(yè):作物遺傳育種指導教師:張愛民20031201AbstractThegeneexpressionpaaemsofanthersofKtypecytoplasmicmalesterilityline54l8A,maintainerline5418BrestorerlineShah229andhybrid(5418A
2、XShah229)Fiattetradstageofmeiosis,mononucleatestage,binucleatestageandtrinucleatestageofpollenwerecharacterizedwithDDRTPCRandcDNAAPLPtechniquesAtthesalnetimetheTaLonlgenewasisolatedthroughthehomologouscloningapproachTher
3、esultsageasfollowing1TheDDRTPCRwasoptimizedandamorestableDDRTPCRmethodwasestablishedBasedonthemethodofBachemetal,somemodificationsweremadeforcDNAAFLPthedigestofcDNAandtheligationwereperformedatthesametimeforsavingtime267
4、and72candidatebandsgeneratedbyDDRTPCRandcDNA—AFLPrespectivelywererecoveredfromdenaturedpolyacrylamidegelThetestofthecandidatebandswasimplementedbyreversedotblottingwithprobespreparedbylabelingthecDNAsof5418A,5418Bandhyri
5、datbinucleatestageofpollendevelopmentwithP“Fivefertilityrelatedpositivecandidatebandswereobtained,whichageDD59,DD63,AFLP49,AFLP55andAFLP82representingpyruvatedehydrogenaseElosubunit,glycosyltransferase,F(xiàn)boxmyotubularin,t
6、yrosyltRNAsynthetaserespectively,Amongthem,theexpressionsofAFLP49andAFLP55werehigherin5418A,whiletheexpressionsofDD59,DD63andAFLP82werelowerin5418AWithESTassemblymethod,wegotthecompleteopenreadingframeofpyruvatedehydroge
7、naseE1asubunitgeneinwheatTheputativewheatElQsubunitgenewaspredictedtoencodea421aminoacidproteinwithamolecularweightof46kDaUsingthePSORTprogram,thewheatElasubunitwaspredictedtolocateinthemitochondfialmatrixspace3Inyeastan
8、dhumantheATPdependentLonpmteaseplaysanimportantroleinremovaloftheabnormalproteinsandmaintainingmtDNAintegritySarriaetaldemonstratedthattheLonproteasehassomeeffectsoncytoplasmicmalesterility(CMS)incommonbeanInthisdisserta
9、tion,weisolatedagene,TaLonl,inwheatthatencodesaproductbelongingtotheLonproteasefamilyTaLonlshowsaconstitutiveexpressionpattern,whichindicatesthattheTaLonlplaysahousekeepingroleinwheatUnliketheIongeneinyeastandEcoiltheTaL
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