化妝品用透明質(zhì)酸鈉的質(zhì)量標準及檢驗方法研究.pdf

1、透明質(zhì)酸(hyaluronic acid, HA)，又名玻璃酸，是由D-葡糖醛酸和N-乙酰氨基葡糖雙糖重復單位通過β-(1→4)糖苷鍵和β-(1→3)糖苷鍵構(gòu)成的無分支的糖胺聚糖，廣泛存在于動物組織的細胞間質(zhì)和某些細菌的夾膜中。其相對分子質(zhì)量(Mr)一般為1×105～1×107D，分子中兩種單糖的摩爾比為1∶1。HA常用的制備方法有動物組織提取法和細菌發(fā)酵法。
　　由于HA具有良好的保濕作用、營養(yǎng)作用、皮膚損傷的修復和預防作用、增

2、稠性等，其在化妝品領域的應用也日益廣泛。商品HA一般為其鈉鹽，即透明質(zhì)酸鈉(Sodium Hyaluronate，SH)。本課題重點研究了化妝品用透明質(zhì)酸鈉的理化、衛(wèi)生質(zhì)量標準及相關(guān)檢驗方法。
　　1、外觀性狀目測觀察SH樣品應為白色或類白色顆?；蚍勰?br>　　2、鑒別1）SH樣品供試片的紅外光吸收圖譜(4000cm-1～400cm-1)應與SH紅外光吸收對照圖譜（《紅外光譜集》第四卷1173圖）一致，即在3400cm-1、1

3、610cm-1、1400cm-1、1040cm-1附近有特征吸收。
　　2) SH供試液顯鈉鹽的火焰鑒別反應，在無色火焰上燃燒應顯鮮黃色。
　　3、pH值為6.0～8.0。用pH計測定1mg/ml的SH供試液，其pH值應為6.0～8.0。
　　4、溶液的透光率(0.5％，A550nm)≥99.0％
　　以純化水作空白，在550nm波長處測定5mg/mlSH溶液的透光率應≥99.0％。
　　5、干燥失重≤10

4、.0％
　　本研究對5批SH樣品用烘箱干燥法測得干燥失重為:6.40、6.44、6.35、6.23、6.30;恒溫減壓干燥法測得為:6.38、6.43、6.30、6.17、6.22;鹵素水分測定儀測得為:6.42、6.48、6.31、6.19、6.26。三種方法得出的結(jié)果基本一致，但前兩種方法所需的時間較長，用鹵素水分測定儀在110℃、15分鐘即可完成干燥失重測定。
　　6、平均相對分子量
　　本研究對5批SH樣品用多

5、點法測得的特性粘度[η]分別為:27.32、24.64、22.56、16.18、13.42;用一點法測定[η]分別為:27.54、22.57、23.62、16.85、14.27。一點法與多點法所測得SH的[η]非常接近，在保證T0大于100s，且Ti/T0=1.30～1.50時，可用一點法代替多點法測定SH的[η]。再由公式計算SH平均相對分子量。
　　7、透明質(zhì)酸鈉含量（以干品計）≥92.0％
　　本研究以Bitter和M

6、uir改良的咔唑法首先測定SH樣品的葡萄糖醛酸的含量，再乘以2.0675(401.3/194.1=2.0675)，即得。并進行了含量測定方法驗證。
　　準確度試驗:采用標準加入法測定對照品的平均回收率為98.7％（回收率要求為98.0～102.0％），符合驗證要求。
　　精密度試驗:采用重復測定6份供試品含量結(jié)果的相對標準偏差來表示，測定結(jié)果的相對標準偏差為1.15％，符合相對標準偏差不得大于2.0％的驗證要求。
　　

7、線性和范圍試驗:方法適用范圍為葡萄糖醛酸的濃度為0～50μg/ml;在此范圍內(nèi)，以葡萄糖醛酸濃度和吸光度計算回歸方程，相關(guān)系數(shù)為0.9998，符合相關(guān)系數(shù)不得小于0.990的要求。
　　耐用性試驗:本研究主要考察反應時間對測定結(jié)果的影響。經(jīng)試驗，第一步水解加熱時間大于8分鐘后測定結(jié)果恒定，為保證水解反應，最終確定第一步水解加熱時間為10分鐘;第二步顯色反應水浴加熱時間為15分鐘，在試驗中應嚴格控制。
　　專屬性:本法適用于含

8、葡萄糖醛酸分子在酸性條件下水解的多糖類化合物，專屬性不強。但歐洲藥典和國家藥品標準中均用該法作為含量測定的法定方法。
　　8、蛋白質(zhì)含量（以干品計）≤0.1％
　　本研究對5批SH樣品用Folin-酚法測得的蛋白質(zhì)含量(％)為:0.17、0.21、0.18、0.23、0.19;考馬斯亮藍法測得的蛋白質(zhì)含量(％)為:0.0095、0.014、0.021、0.017、0.030。前者測定結(jié)果明顯高于后者。考馬斯亮藍法靈敏度高，更

9、適用于蛋白質(zhì)為少量成分的SH樣品。
　　9、重金屬含量（以Pb計）≤20ppm
　　本研究將1.0g SH經(jīng)過一系列化學處理后制成25 ml供試液;同時制備25 ml含標準鉛20ppm的對照液。在對照液管和供試液管中分別加入硫代乙酰胺試液2ml，顯色后，供試液管顯出的顏色不得更深于標準對照管。
　　10、細菌數(shù)≤100cfu/g;霉菌及酵母菌數(shù)≤50cfu/g;每克供試品中金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、糞大腸菌群均不得