一株青霉產(chǎn)纖維素酶的發(fā)酵條件優(yōu)化及其酶學(xué)特性研究.pdf

1、從土壤當(dāng)中篩選到一株生長速度較快、對纖維素降解效果較好的霉菌菌株。根據(jù)其形態(tài)學(xué)特征及生理生化特性初步鑒定該菌株為青霉屬的土生青霉。在此基礎(chǔ)上對該菌株在不同培養(yǎng)條件下的最佳液體產(chǎn)酶培養(yǎng)基的組成進(jìn)行了優(yōu)化，對粗酶的單一酶組分的生化性質(zhì)進(jìn)行了研究，對該菌株所產(chǎn)纖維素酶進(jìn)行了分離純化。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果具體如下:
　　利用纖維素雙層平板法從土壤當(dāng)中篩選到一株對球磨纖維素粉CF-11降解效果較好的菌株。利用劃線法純化以后，接種到查氏培養(yǎng)基

2、上結(jié)合插片法觀察菌落的外部特征以及菌絲和孢子等的形態(tài)特征，對照《真菌鑒定手冊》和相關(guān)文獻(xiàn)確定該菌株是青霉屬的土生青霉（Penicilliun terrestre），我們將其命名為土生青霉DS-811(P.terrestre DS-811)菌株。
　　將青霉DS-811菌株分別接種到6種不同的液體培養(yǎng)基中，通過比較每種培養(yǎng)基中的CMC酶活和濾紙酶活，綜合CMC酶活和濾紙酶活以及產(chǎn)酶時(shí)間，確定了最佳初始液體產(chǎn)酶培養(yǎng)基的組成。以初始產(chǎn)酶

3、培養(yǎng)基為基礎(chǔ)對青霉DS-811菌株進(jìn)行最佳產(chǎn)酶培養(yǎng)基的優(yōu)化，優(yōu)化因子有:碳源，氮源，培養(yǎng)溫度，初始pH值，接種量和搖床轉(zhuǎn)數(shù)等。結(jié)果表明:以2％羧甲基纖維素鈉為碳源，以1％硝酸銨為氮源;培養(yǎng)溫度為30℃;培養(yǎng)基的初始pH值為7.0;接種量為12.5％;搖床轉(zhuǎn)數(shù)為140r/min為是最佳培養(yǎng)條件。在此條件下培養(yǎng)144h可以得到很高的纖維素酶酶活力，CMC酶活力為103.31U/ml，F(xiàn)P酶活力為53.34U/mL。
　　將粗酶液進(jìn)行了

4、超濾、鹽析、透析和冷凍干燥，得到了粗酶粉末，對粗酶的性質(zhì)研究表明，CMC酶的最適反應(yīng)溫度為40-60℃，最適反應(yīng)pH均為4.0，在溫度30℃-50℃和pH5.0條件下較穩(wěn)定。經(jīng)Sephadex G-100凝膠層析柱分離，得到了CMCase的純酶組分，具有較高的CMC酶活力。將該純酶組分經(jīng)SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳檢驗(yàn)純度，結(jié)果顯示有單一蛋白譜帶出現(xiàn)，即分離得到了青霉DS-811菌株的CMC酶的單一酶組分。利用SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳法