過氧化氫酶固體脂質(zhì)納米粒的制備及穩(wěn)定性研究.pdf

1、過氧化氫酶能夠以過氧化氫為底物，通過催化一對電子的轉(zhuǎn)移而最終將其分解為水和氧氣，從而能起到清除自由基的作用，在醫(yī)藥業(yè)上具有良好的應(yīng)用前景。過氧化氫酶作為一種蛋白類藥物，自身存在諸多的缺陷：穩(wěn)定性差，在酸、堿或酶的作用下易失活；分子量大，常以多聚體形式存在，難以通過胃腸道豁膜細(xì)胞，導(dǎo)致吸收屏障的產(chǎn)生；使用不便，一般只能注射給藥；體內(nèi)半衰期短，消除快，無法充分發(fā)揮其療效；在體內(nèi)只與特定的受體結(jié)合而起作用，受體在組織的分布特性會顯著影響藥效。

2、為了克服其上述缺點，本課題采用固體脂質(zhì)納米粒作為載體對過氧化氫酶進(jìn)行包載，對其工藝進(jìn)行優(yōu)化，制備出包封率高、粒子穩(wěn)定的脂質(zhì)體，并對過氧化氫納米脂質(zhì)體的釋放性能以及釋放出的過氧化氫酶與原樣過氧化氫酶的結(jié)構(gòu)進(jìn)行了比較。
　　 采用多重乳狀液（W/O/W）法進(jìn)行制備。通過單因素試驗和響應(yīng)面試驗，對其制備工藝進(jìn)行了優(yōu)化。首先，以酶活為評價指標(biāo)綜合考慮乳化效果，考察有機(jī)溶劑和乳化方式的影響，結(jié)果表明以二氯甲烷/丙酮（1/1）作為有機(jī)溶劑，

3、超聲兩步乳化時間分別20s和30s，效果最好。其次，以包封率為指標(biāo)，在單因素實驗基礎(chǔ)上通過響應(yīng)面設(shè)計考察了內(nèi)相乳化劑濃度、外相乳化劑濃度和第二相體積比的影響，得到最佳工藝參數(shù)：內(nèi)相乳化劑濃度15.24％，外相乳化劑濃度1％，第二相體積比1:4。在上述最佳條件下，以三棕櫚酸甘三酯為固脂基質(zhì)，所得樣品包封率達(dá)到74.51％，載藥量為3.58％。三個因素對包封率的影響：外相乳化劑濃度＞第二相體積比＞內(nèi)相乳化劑濃度，且第二相體積比與外相乳化劑濃

4、度具有顯著的交互作用。
　　 在最佳工藝條件下，對三棕櫚酸甘油酯及單硬脂酸甘油酯作為基質(zhì)對包封率及粒子形態(tài)的影響進(jìn)行了分析，結(jié)果表明以三棕櫚酸甘三酯得到的產(chǎn)品粒子形貌為球型、形態(tài)較為均一、粒子穩(wěn)定，但以單硬脂酸甘油酯制備得到的產(chǎn)品包封率和載藥量較高。在最佳工藝條件下，對三棕櫚酸甘油酯及混合脂質(zhì)（三棕櫚酸甘油酯/MCT）對包封率、粒子分布及釋放穩(wěn)定性的影響進(jìn)行了比較分析，結(jié)果表明加入少量MCT（5％）有利于提高包封率（81.40％

5、）和載酶量（3.89％），并對粒徑、電位分布無太大影響。
　　 體外釋放研究表明1.5％的甘氨酸能作為穩(wěn)定劑，MCT的加入能加快初期釋放速率，為體內(nèi)迅速起效并維持較長平穩(wěn)的血藥濃度的治療目標(biāo)，開辟了一種制劑學(xué)的新手段。將其釋放曲線進(jìn)行模型擬合，均符合Higuchi方程，表明體外釋藥性能符合長效制劑特征。
　　 對釋放出的過氧化氫酶與原樣過氧化氫酶進(jìn)行酶活測定、遠(yuǎn)紫外-圓二色光譜分析和SDS-PAGE電泳，結(jié)果表明酶活力沒