桂花DAD-1同源基因片段的克隆及表達分析.pdf

1、分類號:密級華中農業(yè)大學碩士學位論文桂花刃以D一I同源基因片段的克隆及表達分析CloningandanalysisofPartialfragmentofl)ID一1homologueGenefromOsmanthus戶只grans碩士研究生:陸玲指導教師:王彩云教授指導小組:宋從文研究員胡惠蓉副教授劉國鋒副教授張俊衛(wèi)副教授寧國貴副教授專業(yè):園林植物與觀賞園藝獲得學位名稱:農學碩士研究方向:園林植物栽培生理授予學位日期:2009年6月華中

2、農業(yè)大學園藝林學學院二00九年六月華中農業(yè)大學碩士學位論文2.2.2.3.1Aclin基因PCR擴增........................................................................……212.2.2.3.2DAD一1基因巢式PCR擴增...............................……，.......................……222.2.2.3.3R

3、ealTimePCR...................................................……，.......................……222.2.2.4PCR產物檢測......……，................................................................................……232.2.2.5PCR產物的回收..……‘..

4、..............................................................................……232.2.2.6回收片段的連接.……，................................................................................……232.2.2.7連接產物的轉化......................

5、..................................................................……242.2.2.8連接產物的鑒定........................................................................................……242.2.2.9測序...................................

6、.........................................................................……242.2.2.10克隆片段序列及分析...............................................................................……243.結果與分析....................................

7、............................……，.........................................................……253.1桂花花瓣總RNA提取結果............................……，...............……253.2桂花Actin基因和刀月D一了同源基因的克隆結果與分析.................................

8、..............……263.2.IR下PCR產物……，..................................……‘.........................................................……263.2.1.1Actin基因Rl’PCR產物...................................................................

9、..........……263.2.1.2幾理D一l同源基因Rl’PCR產物..……‘..................................................……，……263.2.2克隆片段的回收、轉化及鑒定............................................................................……273.2.2.1Actin基因片段的回收、轉化

10、及鑒定........................................................……273.2.2.2DAD一I基因片段的回收、轉化及鑒定..............................................……‘……283.2.3序列測定結果及分析..........................……，................，……283.2.3.1Acti。基因序

11、列分析.....................................................……283.2.3.2D月D一了序列分析..........................................................……303.3D月D一了在不同時期花瓣中的表達差異檢測...........................................................

12、.......……334.結論與討論...........................................................................................................................……、……344.1桂花花瓣總RNA的提取....................................................……344.

13、2PcR體系和程序..................................................................……344.3桂花Acti。基因的克隆.......................................................……354.4桂花刀月D一了同源基因片段的克隆................................................

14、................................……364.4.1桂花D月刀刁基因同源片段的獲得.，....................................................................……364.4.2不同植物刀月D一I基因的親緣關系比較..............................................................……364

15、.5不同時期花瓣及咬刀刁荃因的表達分析.............……，.....……，.......................................……374.6本實驗存在的不足與今后研究展望...............................................................................……37參考文獻.............................

16、........................................................……，.............................................……39致謝..................................................................……，.........................................

17、.................……，.……，.45附錄........................................................................................……，...........................……，...........……46附錄1.常用緩沖液、溶液及培養(yǎng)基的配制二，..................................

18、..................................……46附錄2.RNA酶活勝的滅除方法...........................，……46附錄3.基因信息...............……，.......................................................................................……47附錄4.pMD18一T載體信息…，.