茶餅粕黃酮苷的提取分離、化學(xué)結(jié)構(gòu)表征及生物活性研究.pdf

1、我國是世界上最大的茶油生產(chǎn)國,年產(chǎn)茶油十幾萬噸,但油茶籽榨完油后的油茶餅粕利用率非常低,資源浪費嚴(yán)重。因此,研究茶餅粕中的活性成分并探索其生理功能,對茶餅粕的綜合利用、提高附加值是非常重要的。本文對茶餅粕黃酮類成分進行了較系統(tǒng)的研究,對茶粕黃酮的提取方法進行了選擇和工藝的優(yōu)化,建立了高速逆流色譜分離純化的參數(shù),并通過多種波譜技術(shù)對其結(jié)構(gòu)進行了解析,還對茶粕黃酮的活性進行初步探討,為茶粕黃酮的利用提供科學(xué)數(shù)據(jù)。主要研究內(nèi)容及結(jié)果如下:

2、r>　　 1.分析比較了溶劑提取、熱回流提取、超聲波提取和微波輔助提取四種提取茶粕中黃酮類成分的方法。結(jié)果表明,用微波預(yù)處理提取法提取效率高,時間短,僅15 min茶粕黃酮提取率達1.17％,較傳統(tǒng)的溶劑提取(0.807％)和加熱回流提取(0.959％)2 h的提取率都要高。和超聲波提取2 h(1.23％)相比,雖然提取率略低,但微波預(yù)處理法的提取時間比其縮短了8倍,大大減短了時間消耗。因此,綜合考慮提取率、耗時及耗能等方面,選擇微波

3、預(yù)處理快速提取法提取茶餅粕中的黃酮類化合物。
　　 2.采用高速逆流色譜對茶粕黃酮類成分進行分離和純化。實驗建立了一種快速、高效的分離茶粕黃酮單體的高速逆流色譜方法:以乙酸乙酯-正丁醇-水(含3％乙酸)(1:4:4,V／V)為溶劑系統(tǒng),色譜條件為流動相流速1.5 mL／min,固體轉(zhuǎn)速800 rpm.,進樣量120 mg,進樣液3 mL,,柱溫30℃及檢測波長267 nm。實驗結(jié)果表明,在350 min內(nèi)可以得到二種化學(xué)組分(1

4、1.2 mg單體1和15.4 mg單體2),經(jīng)高效液相色譜分析其純度為99.1％和94.5％。
　　 3.利用波譜技術(shù)對高速逆流色譜分離得到的二種茶粕黃酮單體進行結(jié)構(gòu)解析。經(jīng)對二種單體在紫外光譜、紅外光譜、液質(zhì)聯(lián)用以及核磁共振等多種波譜技術(shù)中得到的特征結(jié)果的解析,發(fā)現(xiàn)二種單體的結(jié)構(gòu)分別為kaempferol3-O-{α-L-rhamnopyranosyl-(1→6)-β—D-glucopyranoside)-7-O-β—D—gl

5、ucopyranoside和 kaempferol3-O-β-D-glucopyranosyl-(1→4)-α-L-rhamnopyranoside}-7-O-α-L-rhamnopyranoside,這二種黃酮均為首次從茶粕中分離得到。
　　 4.探討了兩種茶粕黃酮單體的功能作用。通過分光光度法,測定了黃酮單體對DPPH自由基的清除能力,結(jié)果顯示在濃度5～25μg／mL范圍內(nèi),黃酮單體1的DPPH清除率為17.3％～81.3％

6、,黃酮單體2為19.1％～83.9％,DPPH清除能力均隨著濃度的升高而增強,表明茶粕黃酮有良好的DPPH自由基清除作用,但低于蘆丁和VC的清除能力。另外,用MTT法測定了二種黃酮單體對H2O2損傷的人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)的保護作用,數(shù)據(jù)表明,單體1在濃度為10,100μg／mL時,OD490nm顯著增加(P<0.05),說明對損傷的HUVECs有一定的保護作用,當(dāng)濃度為1000μg／mL時,OD490nm無顯著性差異(P>