澤瀉α-葡萄糖苷酶抑制劑的篩選及其活性研究.pdf

1、本文以江西省資源豐富的澤瀉Alismaorientalis(Sam.)Juzep.為研究對象,旨在進(jìn)行澤瀉α-葡萄糖苷酶抑制劑的篩選及其活性研究。研究工作由5部分組成:
　　 1.對經(jīng)典的pNPG法進(jìn)行改良,以小鼠小腸a一葡萄糖苷酶為反應(yīng)酶,固定反應(yīng)溫度37℃、pH6.8,建立體外α-葡萄糖苷酶抑制劑微量篩選模型。該模型的優(yōu)化條件為:反應(yīng)時(shí)間10min,酶液添加量20μL,底物添加量20μL。在此條件下,酶活力平均值為85.6U

2、。二甲基亞砜的終濃度宜控制在0.4％以下。篩選結(jié)果顯示,澤瀉正丁醇部分體外具有較強(qiáng)的小鼠小腸α-葡萄糖苷酶抑制活性,IC50為126μg/mL,阿卡波糖(陽性對照)IC50為25μg/mL。
　　 2.采用硅膠柱層析法對澤瀉正丁醇部分進(jìn)行分離,得到六組分(Fr.1,Fr.2,Fr.3,Fr.4,Fr.5,Fr.6),應(yīng)用體外α-葡萄糖苷酶抑制劑微量篩選模型對六組分進(jìn)行活性篩選,結(jié)果顯示Fr.1體外酶抑制活性最高為66.1%,高于

3、阿卡波糖的抑制活性(51.4%),澤瀉正丁醇部分的抑制率為56.30%。
　　 3.應(yīng)用GC/MS分析澤瀉正丁醇部分的化學(xué)組成。結(jié)果總共確認(rèn)了23個(gè)化合物,其中以N,N-二甲基-1,3-二氨基丙烷的含量為最高,分析出萜類物質(zhì):α-萜品烯、4-萜烯醇、萜品油烯。
　　 4.以阿卡波糖為陽性對照,考察濃度為0.002～20.000mg/mL的澤瀉正丁醇部分對小鼠蔗糖酶、麥芽糖酶和豬胰腺α-淀粉酶抑制活性。結(jié)果表明:隨著樣品濃

4、度的增加,離體小鼠小腸蔗糖酶和麥芽糖酶的酶活隨之降低,抑制作用呈現(xiàn)一定劑量依賴性。澤瀉正丁醇部分的IC50分別為0.862mg/mL(蔗糖酶)、0.522mg/mL(麥芽糖酶),阿卡波糖的IC50分別為0.113mg/mL(蔗糖酶)、10.521mg/mL(麥芽糖酶)。澤瀉正丁醇部分對豬胰腺α-淀粉酶的抑制活性很小(2.31%以下),而阿卡波糖表現(xiàn)出極強(qiáng)的α-淀粉酶抑制活性,抑制作用呈現(xiàn)劑量依賴性,最高抑制率為98.59%。昆明小鼠連續(xù)

5、灌胃10天后,澤瀉正丁醇部分和阿卡波糖都能有效抑制小鼠小腸蔗糖酶和麥芽糖酶活性。和生理鹽水組比較,澤瀉正丁醇部分(P＜0.05)能顯著的抑制小鼠小腸蔗糖酶活性。
　　 5.利用大鼠離體小腸囊模型,考察澤瀉正丁醇部分及其分離組分對離體小腸葡萄糖吸收的影響。結(jié)果表明終濃度為0.125、0.250、0.500、1.000、2.000、4.000mg/mL的澤瀉正丁醇部分對離體小腸葡萄糖吸收的抑制作用高于阿卡波糖的最佳抑制作用,但是抑制