產(chǎn)堿性脂肪酶菌株Aspergillus awamori HB-03的篩選與鑒定及脂肪酶酶學(xué)性質(zhì)的研究.pdf

1、脂肪酶是一類能催化水解長(zhǎng)鏈三酰甘油脂的酶,是目前最重要的工業(yè)酶之一。隨著酶生物技術(shù)的迅速發(fā)展,微生物脂肪酶已成為全世界熱門(mén)研究的課題。目前,微生物脂肪酶的應(yīng)用范圍已經(jīng)由最初的食品加工、洗滌、制革行業(yè)擴(kuò)展到化妝品、生物柴油、醫(yī)藥、環(huán)境等眾多工業(yè)和科研領(lǐng)域上。
　　 本文從富含油脂的樣品中篩選到一株產(chǎn)脂肪酶的真菌HB-03,并對(duì)其進(jìn)行了形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)鑒定;對(duì)該菌株的產(chǎn)酶條件進(jìn)行了優(yōu)化;對(duì)脂肪酶進(jìn)行了分離純化,同時(shí)對(duì)其酶學(xué)性質(zhì)做了

2、初步的研究。
　　 (1)來(lái)源于長(zhǎng)沙各地富含油脂的樣品經(jīng)富集培養(yǎng)后,采用平板水解圈法進(jìn)行初篩,得到18株可在以橄欖油為唯一碳源的油脂同化培養(yǎng)基上生長(zhǎng)且形成明顯水解圈的菌株,對(duì)這些株菌進(jìn)行復(fù)篩,獲得一株產(chǎn)酶活力相對(duì)較高的菌株HB-03。
　　 (2)利用形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)手段對(duì)該菌株進(jìn)行了鑒定,通過(guò)對(duì)其菌落特征、個(gè)體形態(tài)的觀察和18S rDNA序列分析,最終確定該菌株為泡盛曲霉(Aspergillus awamori)。<

3、br>　　 (3)通過(guò)對(duì)HB-03菌株的培養(yǎng)條件及初始產(chǎn)酶培養(yǎng)進(jìn)行優(yōu)化,發(fā)現(xiàn)了HB-03菌株的在以1％的橄欖油為誘導(dǎo)物,0.5％的蔗糖為碳源,2％的蛋白胨和0.5％的酵母粉為復(fù)合有機(jī)氮源,0.1％(NH4)2SO4為無(wú)機(jī)氮源,pH為7.0的培養(yǎng)基中,于30℃,180 rpm的搖床培養(yǎng)36 h,可達(dá)最大酶產(chǎn)量—(45.9±2.3)U/mL。
　　 (4)Aspergillus awamori HB-03胞外脂肪酶經(jīng)90％硫酸銨沉

4、淀、Sephadex G-75凝膠過(guò)濾純化,純化倍數(shù)和回收率分別為10.6和18.84％,經(jīng)p-NPP比色法測(cè)得該酶的比活為1862.2 U/mg。SDS-PAGE顯示該脂肪酶分子量約為68 kDa。
　　 (5)對(duì)純化的脂肪酶進(jìn)行酶學(xué)性質(zhì)研究發(fā)現(xiàn),純化酶的最適作用pH和最適作用溫度分別為8.5和40℃,該酶具有一定的熱穩(wěn)定性,在pH7.0-9.0范圍內(nèi)穩(wěn)定性也較好;Cu2+,Fe3+和Mg2+在濃度為1mmol/L,時(shí)就可以抑

5、制酶的活性,其中Cu2+對(duì)脂肪酶活性的抑制作用最大;CTAB和SDS強(qiáng)烈抑制純化酶的活性,而EDTA對(duì)其影響非常微弱;純化脂肪酶對(duì)底物p-NPP酶動(dòng)力學(xué)常數(shù)Km值和Vmax分別是0.13 mmol/L和60.6 mmol/L/min。
　　 綜上所述,分離自長(zhǎng)沙各地富含油脂的樣品的Aspergillusawamori HB-03是一株堿性脂肪酶的高產(chǎn)菌株;對(duì)分離純化自該菌株的堿性脂肪酶的酶學(xué)性質(zhì)研究表明,該酶具有很好的應(yīng)用前景。