根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)的抗寒基因轉(zhuǎn)化突尼斯軟籽石榴研究.pdf

1、突尼斯軟籽石榴因其早果豐產(chǎn)、果形美觀、裂果輕、皮薄、味甜多汁，尤其是核仁極軟、成熟期恰逢仲秋，成為目前黃河以南石榴栽培中的優(yōu)良品種，但因其抗寒能力較差，在低溫年份時(shí)，生產(chǎn)栽培中的易出現(xiàn)凍害現(xiàn)象，這已經(jīng)成為不容忽視的問題。運(yùn)用傳統(tǒng)的育種手段進(jìn)行品種的改良，由于受到周期長、自交不親和及基因間的緊密連鎖等因素的影響而導(dǎo)致育種進(jìn)程緩慢?；蚬こ痰某霈F(xiàn)，成為實(shí)現(xiàn)目標(biāo)性狀改良的一種快速的有效途徑。本試驗(yàn)利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化體系，將抗寒基因轉(zhuǎn)入到

2、突尼斯軟籽石榴中，以期獲得抗寒的新種質(zhì)。主要的研究結(jié)果如下:
　　1.對(duì)LBA4404和EHA105兩種農(nóng)桿菌菌株遺傳轉(zhuǎn)化力的研究，結(jié)果表明LBA4404侵染能力較強(qiáng)，得到的轉(zhuǎn)化苗數(shù)多于EHA105菌株，但就污染率和褐化率來說，EHA105菌株的污染率和褐化率則低于LBA4404菌株。但對(duì)于最佳的農(nóng)桿菌菌株的優(yōu)化還需要進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)研究。
　　2.通過對(duì)遺傳轉(zhuǎn)化過程中共培養(yǎng)溫度的研究，結(jié)果表明在19℃的共培養(yǎng)條件下，葉片和愈傷組

3、織的污染率和褐化率得到明顯改善，其中愈傷組織經(jīng)過共培養(yǎng)培養(yǎng)和篩選培養(yǎng)之后，得到抗性愈傷組織和抗性芽，因此，適宜突尼斯軟籽石榴遺傳轉(zhuǎn)化的共培養(yǎng)溫度為19℃
　　3.分別以突尼斯軟籽石榴的葉片、愈傷組織作為外植體進(jìn)行抗寒基因的遺傳轉(zhuǎn)化，研究結(jié)果表明，突尼斯軟籽石榴的愈傷組織作為外植體，進(jìn)行農(nóng)桿菌的侵染，得到了抗性愈傷組織，并有轉(zhuǎn)化苗的分化。因此，愈傷組織為良好的外植體侵染材料。
　　4.優(yōu)化選擇轉(zhuǎn)化苗再生體系，結(jié)果表明侵染過的愈

4、傷組織第一次繼代的最佳培養(yǎng)基為:MS+ NAA0.5 mg/L+6-BA1.5 mg/L+GA0.3 mg/L+KT1.0 mg/L+PVP1.0 g/L+Kan50mg/L+Cef500 mg/L，抗性芽伸長生長的最佳培養(yǎng)基為:MS+NAA0.5 mg/L+6-BA1.0mg/L+ GA0.3 mg/L+ KT1.0mg/L+PVP1.0 g/L+ Cef500 mg/L+ Kan50 mg/L。
　　5.提取LBA4404農(nóng)桿