雞傳染性法氏囊病毒的VP2基因原核表達及抗原性分析.pdf

1、雞傳染性法氏囊病(Infectiousbursaldisease,IBD)是由傳染性法氏囊病毒(Infectiousbursaldiseasevirus,IBDV)引起的3～12周齡雛雞及青年雞的一種急性、高度接觸性免疫抑制傳染病。其通過破壞雞的中樞免疫器官-法氏囊,使免疫器官和免疫活性細胞功能受到嚴重損傷,從而出現(xiàn)不同的免疫抑制。該病潛伏期較短,發(fā)病率高,給我國養(yǎng)禽業(yè)造成巨大的經(jīng)濟損失。
　　 IBDV可以編碼5種病毒蛋白,分

2、別為VP1、VP2、VP3、VP4、VP5。其中VP2為主要的結(jié)構(gòu)蛋白,暴露在核衣殼的外面,并攜帶有病毒的主要中和性抗原表位,它能誘導宿主產(chǎn)生針對IBDV的中和性抗體,這種抗體能保護易感雞使其免受IBDV的感染。
　　 近年來,由于超強毒株和變異毒株的出現(xiàn),導致雞傳染性法氏囊病的防治面臨巨大的壓力。因此,需要開發(fā)更加安全、有效的新型疫苗。
　　 本課題主要做了以下幾個方面的研究:
　　 1.從遼寧省周邊地區(qū)采集疑

3、似雞傳染性法氏囊病病雞的法氏囊組織。實驗室處理后將含有傳染性法氏囊病毒的上清液接種至SPF雞胚絨毛尿囊膜,分離病毒,用瓊脂免疫擴散試驗進行檢測,并結(jié)合動物回歸試驗,初步鑒定分離的毒株為雞傳染性法氏囊病毒強毒株。
　　 2.采用SPF雞胚接種法增殖IBDV病毒,以收集的尿囊液為材料,使用Trizol試劑法提取病毒的總RNA,參照Genebank上發(fā)表的傳染性法氏囊病毒VP2基因序列設(shè)計相應(yīng)的引物,運用RT-PCR技術(shù)對傳染性法氏囊

4、病毒的VP2基因進行克隆和測序。將獲得的VP2基因序列與Genebank中已經(jīng)發(fā)表的雞傳染性法氏囊病毒毒株VP2基因序列進行比對其同源性高達99％,表明該分離毒株為雞傳染性法氏囊病毒強毒株。
　　 3.將得到的目的基因連接到pET28a原核表達載體中,得到重組質(zhì)粒pET28a-VP2。經(jīng)過PCR、酶切及測序分析,確定目的基因插入位置、方向和讀碼框完全正確,與預期序列相符。再將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到大腸桿菌BL21(DE3)中,使用IPT